FⅧ、FⅨ的致病機理

血友病A（FA）和血友病B（FB）是由于FⅧ和FⅨ基因的突變而引起的血液凝固紊亂的X染色體隱性遺傳病，正因為是X染色體隱性疾病，只有當(dāng)父母雙方都攜帶致病基因時，女孩XX才會發(fā)病，而男孩XY因為只有一條X染色體，只要父母雙方一方攜帶致病基因，男孩就有可能致病，故臨床上血友病常為男孩發(fā)病。

FⅧ和FⅨ凝血因子是人體血液凝固過程中不可或缺的成分，當(dāng)這些基因受到突變時，人體無法產(chǎn)生足夠的凝血因子，從而導(dǎo)致患者在受傷或手術(shù)后無法正常止血。

FⅧ基因已報道的突變多達(dá)3000種以上，其中錯義突變和無義突變約占57.4%，主要在肝臟中表達(dá)，遺傳異質(zhì)性高，無突變熱點，但F8基因內(nèi)含子22倒位是重型血友病A主要原因，即FⅧ基因在內(nèi)含子22處發(fā)生斷裂和倒位，使FⅧ基因外顯子1-22與外顯子23-26分離，無法進(jìn)行正常轉(zhuǎn)錄，造成FⅧ因子嚴(yán)重缺乏，導(dǎo)致重型血友病A的發(fā)生^[1]。

FⅨ基因突變數(shù)據(jù)庫中已報道3000多種相關(guān)突變，其中點突變（60.8%）占了最大的比例，大片段缺失約占其中的7.5%，無突變熱點報道。
 

FA和FB的基因治療

血友病A（約1/5000）較血友病B發(fā)病率高（約1/25000），長期以來血友病A被認(rèn)為是基因治療的理想靶點，因為1%-5%的正常血漿FⅧ可以顯著改善患者的生活質(zhì)量，比如最常見的酶替代療法管線，Spark公司的Spk-9001，把FⅨ變體Padua特異表達(dá)在肝臟細(xì)胞內(nèi)來改善凝血功能，達(dá)到治本效果。

為了能從根本上治療血友病，Intellia公司通過CRISPR/Cas9在非人靈長類動物的肝臟中靶向插入FⅨ基因，可產(chǎn)生正常水平或更高水平FⅨ，目前正在IND申請階段^[2]；同時文獻(xiàn)中也有許多CRISPR療法^[3-4]�？梢钥闯鯟RISPR療法在治療血友病中有著光明的前景，這也對小鼠模型的基因人源化程度提出了更高的要求。特別是FⅧ和FⅨ基因的致病突變多且異質(zhì)性強，而文獻(xiàn)中現(xiàn)有研究以KO小鼠為主，無法滿足基因療法對臨床前動物模型的要求。

想了解更多人源化小鼠的構(gòu)建技術(shù)以及在基因治療中的應(yīng)用？

「碼」上下載《人源化小鼠模型的構(gòu)建和應(yīng)用》PDF

應(yīng)運而生的血友病全人源化模型

針對當(dāng)前的研究困境，賽業(yè)生物啟動了「下一代全基因組人源化模型構(gòu)建計劃」HUGO-GT^TM（HUGO-GT: Humanized Genomic Ortholog for Gene Therapy），成功構(gòu)建了血友病相關(guān)的全基因組人源化模型：hFⅧ和hFⅨ小鼠，在X染色體上用人FⅧ或人FⅨ基因（全基因組）原位替換鼠源基因，可以實現(xiàn)動物模型與人類疾病致病機理同源性一致。

X染色體基因突變導(dǎo)致的疾病除了血友病，還有MeCP2基因突變導(dǎo)致的雷特綜合征、DMD基因?qū)е碌亩攀霞�營養(yǎng)不良癥等，賽業(yè)生物可以提供hFⅧ、hFⅨ、FⅪ、hMeCP2、hDMD等HUGO-GT^TM全基因組人源化小鼠，并在該基礎(chǔ)上構(gòu)建熱門點突變疾病模型，更適用于遺傳性疾病研究和基因治療藥物開發(fā)。