CAR-T細(xì)胞療法是一種新興的腫瘤免疫治療方法，對(duì)比傳統(tǒng)的手術(shù)方法具有著自身不可替代的優(yōu)勢(shì)和發(fā)展?jié)摿Α?strong>在CAR-T技術(shù)的實(shí)施中，CAR分子構(gòu)建和慢病毒包裝是非常重要的。盡管近些年來，CAR分子設(shè)計(jì)和細(xì)胞功能的改進(jìn)有了明顯提高，慢病毒載體的研究也有了很大進(jìn)展，但距離在臨床上穩(wěn)定應(yīng)用還有很長(zhǎng)的路要走。

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Q1：設(shè)計(jì)CAR分子時(shí)候?qū)θ绾魏Y選合適的抗體scFv序列？
Answer
選擇用于構(gòu)建CAR-T細(xì)胞的抗體有兩個(gè)很重要的指標(biāo)：抗體的特異性和親和力。特異性決定了所構(gòu)建CAR-T細(xì)胞用于治療的安全性，親和力決定了CAR-T細(xì)胞的功能。CAR-T細(xì)胞構(gòu)建對(duì)所用抗體的親和力要求并不是越高越好，這一點(diǎn)上不同于抗體藥物，而是要有個(gè)適當(dāng)?shù)姆秶�，所以這一點(diǎn)就需要大量的實(shí)驗(yàn)來篩選出親和力適當(dāng)?shù)目贵wscFv序列。

Q2：CAR-T、CAR-NK以及CAR-Macrophage中使用的CAR分子結(jié)構(gòu)上是否有差異？
Answer
用于構(gòu)建CAR-T的CAR分子一般情況下也適合于構(gòu)建CAR-NK和CAR-M。但是，目前也有不少針對(duì)于NK細(xì)胞設(shè)計(jì)的CAR分子，其主要在共刺激信號(hào)分子的使用上不同于CAR-T細(xì)胞的CAR分子，例如其使用DAP10和DAP12作為共刺激信號(hào)；對(duì)于巨噬細(xì)胞的CAR分子，其結(jié)構(gòu)中不需要包含共刺激分子只含有CD3ζ信號(hào)分子，由于CD3ζ和巨噬細(xì)胞Fc受體信號(hào)分子的相似性，因此含CD3ζ信號(hào)分子的CAR-巨噬細(xì)胞也能有效的進(jìn)行特異性的吞噬作用。

Q3：不引入標(biāo)簽的情況下，如何實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞陽性率的檢測(cè)？
Answer
目前市面上有應(yīng)該標(biāo)記的靶蛋白，可以通過這些靶蛋白標(biāo)記CAR-T細(xì)胞結(jié)合流式法來實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞陽性率的檢測(cè)；另外，如果有針對(duì)CAR蛋白scFv的抗抗體，也可以使用抗抗體來檢測(cè)。

Q4：CAR慢病毒的滴度需要達(dá)到多少才能用于CAR-T細(xì)胞構(gòu)建，除滴度這一指標(biāo)外，慢病毒還進(jìn)行哪些指標(biāo)的檢測(cè)？
Answer
一般要求活性滴度要大于1×10^8Tu/ml，除滴度這一指標(biāo)外，一般會(huì)進(jìn)行無菌、支原體以及內(nèi)毒素等常規(guī)檢測(cè)。

Q5：我們構(gòu)建的CAR-T細(xì)胞陽性率總是過低應(yīng)該如何解決？
Answer
一方面可以提高慢病毒的質(zhì)量，例如滴度純度等；另一方面，可以通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件等；再一方面可以通過優(yōu)化CAR分子的結(jié)構(gòu)，因?yàn)镃AR分子的結(jié)構(gòu)以及其穩(wěn)定性都是影響CAR-T細(xì)胞陽性率的重要因素。