近年來，越來越多人提倡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的“3Rs”原則，即Reduction（減少）、 Replacement（替代）與Refinement（優(yōu)化）。出于倫理、科學(xué)和法律方面的考慮，選擇合適的人道終點(diǎn)，將對動(dòng)物的不良影響降到最低，是3Rs中“優(yōu)化”的重要組成部分。

對于高質(zhì)量的腫瘤研究而言，合理的人道終點(diǎn)能降低非特異性的系統(tǒng)效應(yīng)，從而增加所獲得結(jié)果的準(zhǔn)確性；而對于腫瘤項(xiàng)目研究中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來說，健康和福利是毋庸置疑放在首位的。

那么，到底該如何確定腫瘤研究中的人道終點(diǎn)呢？跟著賽博士一起往下學(xué)習(xí)吧。

一、如何確定腫瘤研究中的人道終點(diǎn)？
首先聲明，本文所提出的人道終點(diǎn)，是基于廣泛使用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)而言。若細(xì)化到每一項(xiàng)研究中，都應(yīng)該考慮實(shí)驗(yàn)本身進(jìn)展的特點(diǎn)，來控制人道終點(diǎn)。例如，一旦腫瘤進(jìn)展明顯，致癌性研究就可以終止；反之，有些腫瘤在其發(fā)展后期才會(huì)發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，則需要推遲人道終點(diǎn)，比如致癌物誘導(dǎo)的皮膚乳頭狀瘤。

1預(yù)實(shí)驗(yàn)，用以確定腫瘤生長的完整程度，將有助于確定可靠和精確的人道終點(diǎn)。
特定模型的人道終點(diǎn)還必須考慮到所述特定腫瘤模型的已知發(fā)病機(jī)制，并應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)定期審查。成像技術(shù)有助于為某些腫瘤模型開發(fā)提供更明確的人道終點(diǎn)。我們應(yīng)盡一切努力，找出各種影響因素，并結(jié)合考慮到對動(dòng)物福利的影響，盡早作出科學(xué)決定。故意以死亡作為終點(diǎn)，是不可接受的行為。

2固體腫瘤的位置選擇將影響最大可接受腫瘤負(fù)荷和適當(dāng)?shù)娜说澜K點(diǎn)。
（1）腳墊、尾巴、眼睛或骨頭等部位可能會(huì)疼痛或痛苦，需要特殊的理由以及更早的人道終點(diǎn)。同樣，轉(zhuǎn)移到敏感部位的腫瘤也需要非常小心。

（2）如果必須要進(jìn)行腦部腫瘤，比如為了增進(jìn)對腦腫瘤生物學(xué)特性的了解、并開發(fā)治療方法，據(jù)報(bào)道，體重減輕可以作為人道終點(diǎn)指標(biāo)，核磁共振或生物發(fā)光成像（BLI）技術(shù)可能非常有用。

（3）肌內(nèi)腫瘤是痛苦的，只有在原位研究（如肉瘤）有充分理由的情況下才可以進(jìn)行。

3對于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，需要特別照顧，以確保及時(shí)檢測出腫瘤發(fā)展的意外部位。
與所有內(nèi)部腫瘤部位一樣，這包括臨床檢查、體重測量、腹部觸診和狀態(tài)變化。在實(shí)驗(yàn)開始前，研究人員、獸醫(yī)和動(dòng)物飼養(yǎng)管理人員之間，必須進(jìn)行討論以確定人道終點(diǎn)、專業(yè)的飼養(yǎng)管理和干預(yù)措施。通過檢測和評估實(shí)驗(yàn)分析數(shù)據(jù)（如藥效學(xué)測定、功能成像），獲取詳細(xì)的表型信息，有助于確定合理的終點(diǎn)。
 

用于癌癥治療研究中的動(dòng)物技術(shù)示例^[1]

二、腫瘤負(fù)荷
腫瘤負(fù)荷在臨床上是指腫瘤對機(jī)體的危害程度，一般情況下，評估包括腫瘤大小、腫瘤活躍程度、腫瘤轉(zhuǎn)移，以及腫瘤位置對機(jī)體的危害程度等。評估腫瘤的大小和負(fù)荷是確定人道終點(diǎn)的重要依據(jù)。

1腫瘤負(fù)荷應(yīng)始終限制在有效的科學(xué)結(jié)果所需的最低限度
療效研究一旦顯示出持久的、統(tǒng)計(jì)上顯著的治療效果，就應(yīng)該終止。治療性研究的設(shè)計(jì)應(yīng)控制腫瘤體積，避免腫瘤過大。任何腫瘤在單純用于常規(guī)移植或作為腫瘤組織來源時(shí)都應(yīng)限制其大小。在所有情況下，動(dòng)物的總體健康和狀況仍然是最重要的決定因素。對動(dòng)物的不良影響將取決于生物學(xué)、部位、腫瘤的生長方式和任何額外的操作或治療。

對于攜帶單個(gè)腫瘤的動(dòng)物，腫瘤平均直徑在正常情況下，小鼠不應(yīng)超過1.2厘米，大鼠不應(yīng)超過2.5厘米；如果是用于治療研究，分別不應(yīng)超過1.5和2.8厘米。例如，在每只動(dòng)物的對側(cè)長有兩個(gè)腫瘤的地方，腫瘤的大小應(yīng)相應(yīng)減小，且不應(yīng)超過單個(gè)腫瘤的最大負(fù)荷。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中可能發(fā)生多種腫瘤或在受到紫外線輻射或化學(xué)致癌物的動(dòng)物皮膚上進(jìn)行的試驗(yàn)，也應(yīng)該觀察到類似的限制。如果有特殊要求，超過建議的腫瘤大小限制，應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的科學(xué)評估。

2使用游標(biāo)卡尺測量淺表腫瘤的大小是一種簡單易行的方法
確保在研究期間技術(shù)人員熟練且穩(wěn)定，可以將測量偏差最小化。對治療的反應(yīng)可以通過腫瘤生長速度的變化，重新生長的延遲，細(xì)胞存活(通過克隆試驗(yàn)測量)或適當(dāng)?shù)奶娲鷺?biāo)記物來衡量。在研究結(jié)束時(shí)切除腫瘤并稱重可以提供一個(gè)額外的客觀終點(diǎn)，這可以減少由于腫瘤形狀變化和體積或質(zhì)量評估的誤差。

3預(yù)實(shí)驗(yàn)、觀測替代標(biāo)志物是有效的輔助手段
確定內(nèi)部原位癌、系統(tǒng)性淋巴網(wǎng)狀腫瘤或轉(zhuǎn)移性疾病的腫瘤負(fù)荷是具有挑戰(zhàn)性的。使用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，對于確定腫瘤傳播動(dòng)力學(xué)和模式、預(yù)測臨床癥狀和確定人道終點(diǎn)都非常重要。生物標(biāo)志物或循環(huán)癌細(xì)胞可作為評估淋巴瘤和白血病負(fù)荷的替代物，通過實(shí)時(shí)成像監(jiān)控這些替代物，是種有效的輔助手段。我們應(yīng)使用適當(dāng)?shù)纳�化和病理指�?biāo)、工程報(bào)告系統(tǒng)或成像技術(shù)來確定疾病的開始。還必須根據(jù)動(dòng)物的一般情況，以及可觸到的腫瘤和特定體征（如后肢無力或癱瘓）進(jìn)行評估。
 

臨床前癌癥研究中的體內(nèi)成像示例^[1]

三、臨床癥狀
一般情況下，下列情況所示的臨床體征是罕見但嚴(yán)重的潛在不良反應(yīng)癥狀的主要指標(biāo)，在設(shè)計(jì)良好的實(shí)驗(yàn)研究中，此類嚴(yán)重癥狀可能很少出現(xiàn)，應(yīng)避免，一旦發(fā)現(xiàn)應(yīng)立即實(shí)施人道終點(diǎn)，并對研究中其他動(dòng)物加強(qiáng)觀察。

需要立即干預(yù)的動(dòng)物臨床癥狀：

❖24-48小時(shí)內(nèi)不進(jìn)食或不飲水，導(dǎo)致消瘦或脫水。

❖與實(shí)驗(yàn)前的成年小鼠或與同周齡的對照組動(dòng)物相比，72小時(shí)內(nèi)體重持續(xù)或快速下降20%或15%。不過對于某些腫瘤來說，體重不是一個(gè)很好的指標(biāo)，可以使用肌肉萎縮或消瘦作為評價(jià)指標(biāo)。身體狀況評分是非常有用的肌肉損失指標(biāo)。

❖持續(xù)低體溫。

❖從任何天然孔流出有血或粘液膿的分泌物。

❖呼吸困難，特別是伴有流鼻水和/或發(fā)紺。

❖淋巴結(jié)或脾臟腫大。

❖后肢癱瘓或無力。

❖貧血，癥狀如腳部蒼白或血液學(xué)指標(biāo)。

❖顯著腹脹或腹水負(fù)擔(dān)超過體重的10%，和同周齡對照組動(dòng)物相比。很難準(zhǔn)確測定，但可以測量腰圍，通常允許的腰圍最大增加20%；類似于懷孕鼠的外觀。

❖尿失禁或腹瀉超過48小時(shí)。

❖影響運(yùn)動(dòng)或引起異常發(fā)聲、動(dòng)物行為或功能的腫瘤。

另外，對于實(shí)體瘤來說，出現(xiàn)潰瘍，覆蓋組織膨脹和惡病質(zhì)（嚴(yán)重體重下降）應(yīng)納入人道終點(diǎn)的評估。潰瘍是一種淺表組織壞死的典型病變，可能是干燥，化膿或滲出。壞死導(dǎo)致皮膚破裂或滲出持續(xù)超過48小時(shí)可以考慮人道終點(diǎn)。有些腫瘤，如生長在敏感部位或發(fā)展為廣泛壞死的腫瘤，可能給動(dòng)物帶來痛苦，盡管缺乏對小鼠的客觀判斷標(biāo)準(zhǔn)。需要進(jìn)一步的研究，以更好地評估疼痛，并協(xié)助制定最適當(dāng)?shù)娜说澜K點(diǎn)。

總結(jié):
當(dāng)已經(jīng)超出科學(xué)目標(biāo)所需要的動(dòng)物痛苦程度時(shí)，當(dāng)科學(xué)目標(biāo)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)或無法實(shí)現(xiàn)時(shí)，或當(dāng)無法達(dá)到實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量時(shí)，應(yīng)規(guī)定人道終點(diǎn)并采取行動(dòng)實(shí)施人道終點(diǎn)，保障動(dòng)物福利。