產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌凍干管打管說明！
 
一、菌種簡介
平臺編號：bio-56946
拉丁屬名：Escherichia coli STEC
提供形式：凍干物
中文名稱：產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌
拉丁名稱：Escherichia coli STEC
其它保藏中心編號：#NAME?
來源歷史：←上海市疾病預(yù)防控制中心
收藏時(shí)間：2013/4/15
原始編號：EHEC5-92
資源歸類編碼：15131122101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：革蘭氏陰性桿菌，在麥康凱培養(yǎng)基上生長成紅色菌落，菌落圓而突起，能發(fā)酵乳糖。
生物危害程度：三類
培養(yǎng)基編號：CM0002
培養(yǎng)基名稱：營養(yǎng)肉汁瓊脂
培養(yǎng)基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。
培養(yǎng)溫度：37℃
需氧類型：好氧
分離基物：腹瀉病例糞便標(biāo)本
基因元器件：含緊密黏附素基因（eaeA）、志賀毒素基因（stx1、stx2）和毒力基因ehxA，不含estA、eltA、ipaH基因。
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
 
二、儲存條件
凍干菌種和試管斜面請置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌種請置于-20℃冷凍。
 
三、培養(yǎng)條件
1、培養(yǎng)基編號：CM0002
2、培養(yǎng)基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入 5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。
3、需氧類型：好氧
4、培養(yǎng)溫度：37℃
 
四、注意事項(xiàng)
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間：細(xì)菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、試管斜面菌種請盡快轉(zhuǎn)接，不建議長期存放。
3、初次使用時(shí)請按照本說明書推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系或更換新的菌種。
 
五、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉檫試凍干管表面進(jìn)行消毒，將管頂端于酒精燈外焰上均勻加熱；立即滴 2-3 滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂；再用鑷子或其他適宜工具敲下破裂處。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取 0.5ml 左右液體培養(yǎng)基(固體培養(yǎng)基去掉瓊脂即可)于凍干管中將凍干菌粉全部溶解。將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻，可將殘留在吸管中 1-2 滴菌懸液轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上。將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng)。以液體培養(yǎng)結(jié)果為準(zhǔn)。
3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請將安瓿管保存在 2-8℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，需要轉(zhuǎn)接至 2-3 代恢復(fù)活力。
4、復(fù)蘇后的菌種在傳 1-2 代后使用。
5、暫不啟開的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。
6、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
7、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
8、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
 
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