01 文章內(nèi)容 

文章聚焦于鐵死亡抑制蛋白FSP1（ferroptosis suppressor protein-1）的研究。研究人員通過篩選小分子庫發(fā)現(xiàn)icFSP1這一新型 FSP1 抑制劑，它能誘導鐵死亡，且作用機制不同于以往的iFSP1，不直接抑制FSP1酶活性，而是使FSP1發(fā)生亞細胞重定位并凝聚，進而促進FSP1相分離，引發(fā)脂質(zhì)過氧化和鐵死亡。這一過程依賴FSP1的N端肉豆蔻�；�、特定氨基酸殘基及相關(guān)結(jié)構(gòu)區(qū)域。體內(nèi)實驗顯示icFSP1能抑制腫瘤生長，通過誘導FSP1從膜上解離和相分離形成凝聚物，引發(fā)脂質(zhì)過氧化和鐵死亡。文章中利用激光共聚焦顯微鏡為探究icFSP1誘導鐵死亡機制提供關(guān)鍵依據(jù)：

1.icFSP1對hFSP1亞細胞定位的影響：

展示了對穩(wěn)定過表達FSP1–EGFP–Strep的野生型細胞用2.5μM的icFSP1處理后立即采集的代表性時間推移熒光圖像1（下圖c）。結(jié)果顯示，icFSP1處理后，細胞出現(xiàn)明顯焦點和凝聚物，而iFSP1處理組無此現(xiàn)象，表明icFSP1顯著改變hFSP1亞細胞定位，此變化先于脂質(zhì)過氧化和鐵死亡。

 
2.FSP1凝聚物形成過程及特性：

對穩(wěn)定過表達hFSP1-EGFP-Strep的Pfa1細胞用 icFSP1處理，在不同時間點拍攝熒光圖像2（下圖d），觀察到凝聚物數(shù)量隨時間增加，體現(xiàn)其形成的時間依賴性。用鐵死亡標記物（Liperfluo）與碘化丙啶（PI）對穩(wěn)定過表達hFSP1-BFP的細胞進行共染色處理，標記脂質(zhì)過氧化和細胞死亡情況（下圖e）。碘化丙啶具有特殊的染色特性，只有當細胞膜出現(xiàn)破損，其才能進入細胞并對細胞核進行染色。使用icFSP1處理表達hFSP1-BFP的細胞后，細胞內(nèi)迅速誘導產(chǎn)生凝聚物。緊接著，Liperfluo發(fā)生氧化，這意味著細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應開始啟動。此后，細胞內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物信號持續(xù)增強，直至細胞對碘化丙啶染色呈現(xiàn)陽性，這一現(xiàn)象表明細胞膜已破裂，細胞走向死亡。從整個過程可以清晰地看到，F(xiàn)SP1亞細胞定位的改變發(fā)生在脂質(zhì)過氧化和鐵死亡之前，這一結(jié)果為深入理解鐵死亡的發(fā)生機制提供了重要線索。

> Tip1,2：
中心（公司）超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺，提供配套細胞培養(yǎng)箱，可以供即時或不同時間點采集圖像的實驗，可確保實驗的時效性。

3.FSP1凝聚物的動態(tài)變化及相分離特性：

觀察穩(wěn)定過表達hFSP1-EGFP-Strep的Pfa1細胞，發(fā)現(xiàn)icFSP1處理后凝聚物動態(tài)自由移動并融合（下圖a），洗脫抑制劑后凝聚物變化可逆（下圖b）。進行熒光漂白恢復（FRAP）分析3（下圖 c、d），發(fā)現(xiàn)早期凝聚物有FRAP現(xiàn)象，晚期無，結(jié)合其類似液滴的特性，表明hFSP1凝聚物可能涉及相分離。

> Tip3：
中心（公司）超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺配備有熒光漂白恢復（FRAP）功能，可進行樣本定點光照射，并提供光漂白恢復實驗數(shù)據(jù)（時長、圖像等）。

4.FSP1凝聚物與亞細胞結(jié)構(gòu)的關(guān)系：

對穩(wěn)定過表達hFSP1-EGFP-Strep的細胞用icFSP1處理后，與多種細胞器特異性標記物共染4（下圖b），結(jié)果顯示hFSP1凝聚物不與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、脂質(zhì)滴、內(nèi)體、溶酶體等細胞器共定位，表明其并非定位于特定細胞器。

> Tip4：
中心（公司）超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺可進行多通道（410-850nm）同時成像，同時提供單通道和多通道合并數(shù)據(jù)，多通道樣本可根據(jù)客戶要求提供個性化通道合并數(shù)據(jù)。

5.體內(nèi)實驗中FSP1凝聚物檢測：

對腫瘤組織進行免疫熒光染色，用抗HA（hFSP1）抗體標記（下圖g、h），在icFSP1處理的腫瘤組織中，觀察到hFSP1凝聚物信號增強，表明icFSP1在體內(nèi)可誘導FSP1相分離，促進脂質(zhì)過氧化。對過表達不同F(xiàn)SP1突變體的腫瘤組織染色（下圖h），發(fā)現(xiàn)Q319K突變體在icFSP1處理后無凝聚物，細胞對icFSP1耐藥，驗證特定氨基酸殘基在FSP1相分離和藥物敏感性中的重要性。

 
02 文章總結(jié) 

該研究揭示了icFSP1獨特的作用機制，即通過誘導FSP1從膜上解離和相分離形成凝聚物，引發(fā)脂質(zhì)過氧化和鐵死亡。這為理解FSP1的調(diào)控機制提供了新視角，也為開發(fā)新型抗癌療法提供了潛在的藥物靶點和理論依據(jù)，未來應進一步開發(fā)同時靶向cyst(e)ine–GSH–GPX4節(jié)點和FSP1系統(tǒng)的藥物，以更有觸發(fā)腫瘤細胞鐵死亡，為攻克癌癥這一醫(yī)學難題帶來新的曙光。

03 平臺介紹 

中心（公司）超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺搭建的Leica Stellaris 5超高分辨率激光共聚焦系統(tǒng)，具有22mm均勻大視場及8K超高清掃描分辨率兩大優(yōu)勢，同時搭載Power HyD檢測器，可實現(xiàn)更高的光子探測效率。整合的多層智能模塊體系，包含精準自聚焦、全景拼圖、多維時序成像以及光譜解碼等功能組件，尤其配備專業(yè)級共定位分析與智能三維重構(gòu)系統(tǒng)，通過模組化擴展設計持續(xù)賦能生命科學探索新邊界。