大鼠淋巴成纖維細(xì)胞提取物的背景與應(yīng)用！
 
一、背景
 
大鼠淋巴成纖維細(xì)胞提取物是從大鼠原代淋巴成纖維細(xì)胞提取的，大鼠原代淋巴成纖維細(xì)胞從正常大鼠淋巴組織制備可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
 
大鼠淋巴成纖維細(xì)胞分離自正常大鼠淋巴節(jié)，成纖維細(xì)胞是胚胎中胚層起源的間葉細(xì)胞。它們被廣泛地用于細(xì)胞和分子方面的研究。這主要是因?yàn)槔w維原細(xì)胞是體外培養(yǎng)中最容易生長的一類細(xì)胞，它們的耐久力使它們能夠用于基因轉(zhuǎn)染、顯微注射等多種操作。有確鑿的證據(jù)表明，在身體不同的部分的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。
 
組織中的成纖維細(xì)胞暴露在動態(tài)的機(jī)械環(huán)境中將影響健康的和正在愈合的軟組織的結(jié)構(gòu)完整性。纖維原細(xì)胞分泌富含I和，或III型膠原的細(xì)胞外基質(zhì)。另外，有報(bào)道指出在淋巴增生疾病中成纖維細(xì)胞大量增長。大鼠淋巴成纖維細(xì)胞傳10代以上仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。成纖維細(xì)胞胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長時呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。
 
另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時皆可稱之為成纖維細(xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。電鏡下，其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體。處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的成纖維細(xì)胞，胞體變小，呈長梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達(dá)。它具有較強(qiáng)的分裂增殖能力，適應(yīng)性強(qiáng)，是最容易培養(yǎng)的動物細(xì)胞類型之一。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞呈梭形或扁的星狀，具有突起。根據(jù)不同的功能活動狀態(tài)，將細(xì)胞分為成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞二型。
 
二、應(yīng)用
 
大鼠淋巴成纖維細(xì)胞提取物可用于黃芪多糖對口腔黏膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為及實(shí)驗(yàn)性阿弗他潰瘍模型大鼠免疫狀態(tài)影響研究：
 
觀察黃芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)對原代培養(yǎng)口腔黏膜成纖維細(xì)胞(oral mucosa fibroblasts)生物學(xué)行為的影響。通過免疫法建立SD大鼠復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer,RAU)動物模型,研究黃芪多糖對實(shí)驗(yàn)性RAU大鼠模型外周血中T淋巴細(xì)胞及TNF-a含量的影響。
 
方法：
 
1、采用改良組織塊培養(yǎng)法體外原代培養(yǎng)口腔黏膜成纖維細(xì)胞,通過倒置相差顯微鏡觀察其生物學(xué)特性,并用波形絲蛋白、角蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定其來源。
 
2、采用噻唑藍(lán)比色法(MTT)觀察正常培養(yǎng)下的口腔黏膜成纖維細(xì)胞經(jīng)不同濃度黃芪多糖處理后細(xì)胞的增殖情況。同時采用考馬斯亮藍(lán)法檢測口腔黏膜成纖維細(xì)胞蛋白總含量的變化。
 
3、通過免疫方法建立SD大鼠RAU動物模型,將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為5組：正常對照組(A)、陰性對照組(B)、100mg/kg APS治療組(C)、200mg/kg APS治療組(D)、300mg/kg黃芪多糖治療組(E)。連續(xù)灌胃20天后,提取大鼠口腔黏膜做組織病理學(xué)觀察,并分別采用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測各組SD大鼠外周血中T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量和TNF-a表達(dá)水平的變化。
 
結(jié)果：
 
1、口腔黏膜成纖維細(xì)胞的鑒定原代培養(yǎng)3-14天左右可見有成纖維細(xì)胞從組織塊周邊游出,鏡下觀察細(xì)胞呈長梭形,有數(shù)個長短不一的突起,胞體豐滿,細(xì)胞以組織塊為中心呈放射狀或旋渦狀排列。免疫組化顯示：波形絲蛋白染色陽性,角蛋白染色陰性。
 
2、黃芪多糖對口腔黏膜成纖維細(xì)胞增殖的影響與對照組相比,作用24h、48h,黃芪多糖2.5μg/ml 10μg/ml 40μg/ml組均能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖(P<0.05),作用72h,黃芪多糖10μg/ml 40μg/ml 160μg/ml組能促進(jìn)細(xì)胞增殖(P<0.05),且160μg/ml的黃芪多糖表現(xiàn)出最明顯的促細(xì)胞增殖作用,2.5μg/ml黃芪多糖組與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。
 
3、黃芪多糖對口腔黏膜成纖維細(xì)胞蛋白總含量的影響與對照組相比,黃芪多糖作用72h時10μg/ml 40μg/ml 160μg/ml組細(xì)胞蛋白總含量均顯著升高(P<0.05),且160μg/ml黃芪多糖組細(xì)胞蛋白總含量增高最顯著,2.5μg/ml黃芪多糖組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
 
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