人類對大腦結構與功能的探索始終是科學界的核心命題。傳統(tǒng)成像技術雖能提供宏觀解剖信息，卻難以捕捉單細胞水平的精細結構。光學顯微技術雖具備高分辨率，但生物組織的光散射特性嚴重限制了成像深度。光學組織透明化技術經(jīng)歷了從溶劑法到水凝膠介導的主動透明化方法的迭代升級，逐步實現(xiàn)了小鼠全身單細胞分辨率成像，并開始向靈長類及人腦組織拓展。其核心價值在于保留樣本完整性的同時，支持多輪分子標記與多重信息提取，為神經(jīng)環(huán)路重建、腦疾病機制解析和發(fā)育動態(tài)追蹤提供了不可替代的工具。然而，如何在透明化效率、形態(tài)保真度與分子兼容性之間取得平衡，仍是技術優(yōu)化的核心挑戰(zhàn)。

研究背景與技術挑戰(zhàn)
光學散射的本質(zhì)與透明化原理
生物組織的光散射主要源于水分（折射率1.33）與脂質(zhì)、蛋白質(zhì)（折射率1.50）之間的折射率差異。傳統(tǒng)組織切片技術雖能部分解決這一問題，但切片損傷與三維重建誤差限制了其在復雜神經(jīng)網(wǎng)絡研究中的應用。光學透明化技術通過化學置換或物理去除高折射率成分，實現(xiàn)了組織光學均勻性提升，使深層熒光顯微成像成為可能。

技術瓶頸與適配性差異
不同組織類型對透明化試劑的響應差異顯著。溶劑法雖能快速脫脂，但易導致熒光淬滅和樣本收縮；水凝膠法雖保留分子完整性，卻需復雜電泳設備；而單純水化法則受限于透明化速度與樣本尺寸。此外，大體積樣本的均勻標記、成像設備的通量限制，以及海量數(shù)據(jù)的自動化分析，仍是阻礙技術規(guī)�；瘧�用的關鍵瓶頸。

技術創(chuàng)新與應用
在腦科學領域已展現(xiàn)多維應用價值。神經(jīng)環(huán)路重建方面，結合稀疏病毒標記與光片顯微，實現(xiàn)了小鼠嗅覺球內(nèi)僧帽細胞的完整連接圖譜解析，揭示了嗅覺信息編碼的非冗余性特征；全腦細胞圖譜構建中，CUBIC技術配合轉(zhuǎn)基因熒光蛋白，構建了可編輯的小鼠全腦單細胞圖譜，支持神經(jīng)元亞型空間分布的可視化與量化；疾病模型解析中，iDISCO+技術揭示了阿爾茨海默病模型小鼠β淀粉樣斑塊的時空演化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)血管形態(tài)異常早于認知衰退；腦血管網(wǎng)絡可視化方面，SeeNet技術通過膽鹽透明化與血管鑄型，實現(xiàn)了皮層血管平行排列模式的三維解析，為腦缺血再灌注損傷研究提供了新視角。

成像實驗與結果分析
高分辨率成像技術的協(xié)同創(chuàng)新
光片顯微鏡與雙光子成像的協(xié)同創(chuàng)新，顯著提升了透明化樣本的成像效率。以CLARITY技術為例，其透明化的小鼠全腦經(jīng)多輪免疫標記后，可在光片顯微鏡下以2μm體素分辨率采集數(shù)據(jù)，完整呈現(xiàn)基底前腦膽堿能神經(jīng)元的全腦投射網(wǎng)絡。實驗數(shù)據(jù)顯示，中腦多巴胺能神經(jīng)元在黑質(zhì)致密部的空間聚類特性，與帕金森病模型中的選擇性退行高度相關。

總結與展望
光學組織透明化技術通過突破生物組織光散射限制，實現(xiàn)了從宏觀解剖到單細胞水平的三維解析，成為解密腦功能與疾病機制的“終極透鏡”。其核心價值在于兼容分子標記、形態(tài)保真與大數(shù)據(jù)挖掘，已在神經(jīng)環(huán)路重建、腦疾病時空演化分析及發(fā)育動態(tài)追蹤中展現(xiàn)革命性作用。當前技術不僅實現(xiàn)小鼠全腦單細胞成像，更向靈長類及人腦拓展，如SHANEL技術首次實現(xiàn)成人全腦透明化，揭示皮層血管的種屬特異性分支模式。隨著光學工程、計算生物學與臨床神經(jīng)科學的深度交叉，該技術有望成為貫穿基礎研究到臨床診療的全鏈條工具。

論文信息
聲明：本文僅用作學術目的。
Liang X, Luo H. Optical Tissue Clearing: Illuminating Brain Function and Dysfunction. Theranostics. 2021 Jan 1;11(7):3035-3051. 

DOI:10.7150/thno.53979.