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RAW264.7細(xì)胞避免分化的方法及培養(yǎng)的注意事項(xiàng)總結(jié)

瀏覽次數(shù):163 發(fā)布日期:2025-3-18  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
RAW264.7細(xì)胞作為一種經(jīng)典的小鼠巨噬細(xì)胞系,因其易于培養(yǎng)和操作而成為科研工作者的得力助手。然而,RAW264.7細(xì)胞在培養(yǎng)過程中容易發(fā)生分化,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變、功能下降,甚至影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。如何讓RAW264.7細(xì)胞“長得更漂亮”,保持其原始的形態(tài)和功能?今天,我們將為您揭秘RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)的黃金法則,助您輕松駕馭這一細(xì)胞系!

細(xì)胞信息

倍增時間:11-30 hours,(生長快速,消耗營養(yǎng)快速,T25瓶建議添加7ml完全培養(yǎng)基,次日進(jìn)行觀察生長速度)。
傳代比例:1:4-6
培養(yǎng)體系:DMEM高糖(品牌:中喬新舟 貨號:ZQ-100)+10%胎牛血清(中喬新舟 貨號:ZQ0500)+1%雙抗(中喬新舟   貨號:CSP006)
細(xì)胞形態(tài):該株巨噬細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁紡錘形和圓形或者立方形的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度較大時,細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆在一起,有些細(xì)胞甚至脫落漂浮,這些漂浮的細(xì)胞是活的,在傳代時應(yīng)收集起來離心,細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
換液頻率:2~3次/周
 
 
正確傳代方法一

正確的傳代方法是 RAW 264.7 細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵,每一步操作都要細(xì)致入微,稍有不慎細(xì)胞就分化了。RAW 264.7 細(xì)胞不能用胰酶消化,胰酶消化傳代反而更容易分化。我司培養(yǎng) RAW 264.7 細(xì)胞是十余年,摸索出一個刮刀傳代的方法,此方法操作簡單,能更好地控制細(xì)胞分化率。為了更加直觀學(xué)習(xí)傳代步驟,我們用視頻進(jìn)行講解,方便大家更好把控傳代步驟:

正確傳代方法二

當(dāng)您沒有準(zhǔn)備刮刀時,我司建議您按照以下操作步驟進(jìn)行傳代,減少細(xì)胞的分化。
l 細(xì)胞密度達(dá)到80%。用手掌心拍打瓶尾部,觀察細(xì)胞脫落情況。
l 拍打過程中有50-80%的細(xì)胞會脫落。此時收集脫落細(xì)胞。
l 按照1:4-6的比例傳代,并補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基。T25瓶7ml完全培養(yǎng)基。
(切記用槍頭吹打或巴氏吸管吹打,由于每個人吹打力度不同,吹打次數(shù)不同,傳代3-5次后會造成很多不可控因素導(dǎo)致細(xì)胞分化。

以下是我司客戶拍打傳代圖:
 
(客戶按照1:4-6比例傳代,第二天提供20X細(xì)胞狀態(tài)圖。
  
T25培養(yǎng)瓶活細(xì)胞RAW264.7到貨培養(yǎng)須知:

l 放入培養(yǎng)箱靜止2-4h后觀察細(xì)胞貼壁情況,并進(jìn)行拍照。
l 若少量漂浮細(xì)胞,需要離心1200轉(zhuǎn)5分鐘收集細(xì)胞,貼壁細(xì)胞根據(jù)視頻步驟進(jìn)行傳代處理,無刮刀根據(jù)“方法二”進(jìn)行處理。
l 若對傳代密度把控不了和操作步驟還是不了解,可當(dāng)天聯(lián)系我司銷售人員/區(qū)域代理或者我司技術(shù)人員。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

l 該細(xì)胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時,用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。
該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時,細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起,有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的,在傳代時應(yīng)收集起來,離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞生長密度越大時,巨噬細(xì)胞(圓細(xì)胞)就會越多。
l 細(xì)胞對血清質(zhì)量非常敏感,可能引起細(xì)胞貼壁能力變化或者細(xì)胞分化,應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。
l 培養(yǎng)條件、運(yùn)輸、環(huán)境變化等因素會影響此細(xì)胞的狀態(tài),因此收到細(xì)胞后需要調(diào)整一段時間,請耐心培養(yǎng)。
l 強(qiáng)烈推薦使用本公司對應(yīng)的培養(yǎng)基,減少細(xì)胞培養(yǎng)過程的變因。
 
一、 RAW264.7凍存管復(fù)蘇步驟:
 

l 從液氮中取出凍存的raw26.4細(xì)胞,迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室)
l 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中,輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
l 以1000 rpm離心5分鐘,棄上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。(T25添加7ml)
l 將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中,置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
l 以下圖片是我司客戶收到凍存管復(fù)蘇24h后狀態(tài)圖。
 
復(fù)蘇24h后raw264.7細(xì)胞圖,中喬新舟客戶提供,可進(jìn)行傳代。
 
復(fù)蘇24h后raw264.7細(xì)胞圖,中喬新舟客戶提供手機(jī)拍攝,可進(jìn)行傳代。
來源:上海中喬新舟生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-56760351
E-mail:hufangqiong@zqxzbio.com

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