熒光光度計與超微量分光光度計用途比較
熒光光度計與超微量分光光度計兩者均可實現(xiàn)對DNA、RNA以及蛋白質(zhì)濃度的定量，但他們之間有什么區(qū)別呢？
一、技術原理對比
三、性能參數(shù)對比
四、選擇建議
一、技術原理對比
- 熒光計
- 原理：基于熒光染料與靶分子（如DNA、RNA、蛋白質(zhì)）特異性結合的原理，通過激發(fā)光激發(fā)熒光信號并檢測其強度來定量。
- 優(yōu)勢：
- 靈敏度高（最低檢測0.1 pg/μl），線性范圍廣（如dsDNA檢測范圍0.2–100 ng）。
- 特異性強，避免傳統(tǒng)紫外法受雜質(zhì)（如酚類、鹽離子）干擾的問題。
- 超微量分光光度計
- 原理：基于朗伯-比爾定律，通過測量樣品在260 nm（DNA/RNA）、280 nm（蛋白質(zhì)）等波長處的吸光度計算濃度。
- 優(yōu)勢：
- 樣品用量極少（最低0.3 μl），支持全波長掃描（如UV-Vis檢測）。
- 操作簡單，無需額外試劑，可同時檢測核酸純度（A260 /A280，A260 /A230）。
| 技術類型 | 典型應用 | 適用場景 |
|---|---|---|
| 熒光計 | NGS文庫構建前定量、稀有樣本（如microRNA）檢測、轉染實驗前定量 | 需高精度、低樣本消耗的場景，尤其是下游實驗成本高或周期長的研究。 |
| 超微量分光光度計 | 常規(guī)核酸/蛋白質(zhì)定量、菌液密度檢測、污染物分析（如糖類、苯酚） | 需快速篩查樣品濃度或純度的常規(guī)實驗，支持多波長掃描（如UV-Vis、熒光）。 |
三、性能參數(shù)對比
| 指標 | 熒光計 | 超微量分光光度計 |
|---|---|---|
| 靈敏度 | 0.01ng/μl（DNA） | 0.5 μl樣品量，檢測上限可達37500 ng/μl（dsDNA） |
| 線性范圍 | 0.2–100 ng（dsDNA） | 0.75–37500 ng/μl（dsDNA） |
| 雜質(zhì)干擾 | 特異性染料避免干擾 | 需通過A260 /A280，A260 /A230比值評估純度 |
四、選擇建議
- 優(yōu)先選熒光計（達遠辰光熒光計）：當樣本珍貴（如單細胞測序）、需高靈敏度或下游實驗成本高時。
- 優(yōu)先選超微量分光光度計：常規(guī)核酸/蛋白定量、快速篩查或需多波長檢測時。
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