作為構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，神經(jīng)細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)在神經(jīng)科學(xué)研究中占據(jù)前沿地位。由于神經(jīng)元分離后不會(huì)再次分裂、增殖，因此在進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要高效地制備高質(zhì)量原代神經(jīng)細(xì)胞保證實(shí)驗(yàn)材料的供應(yīng)。

然而神經(jīng)細(xì)胞的分離制備難度較大，相較于新生鼠，成年鼠腦的解離更復(fù)雜，需要機(jī)械和酶解聯(lián)合作用來(lái)降解細(xì)胞外基質(zhì)，同時(shí)大量的髓鞘碎片和紅細(xì)胞也會(huì)干擾下游實(shí)驗(yàn)。

那么，如何快速制備高質(zhì)量的大/小鼠神經(jīng)細(xì)胞懸液樣本呢？接下來(lái)，我們從實(shí)驗(yàn)儀器及材料、實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果一一介紹，希望對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有所幫助。

實(shí)驗(yàn)儀器及材料

瑞沃德 DSC-400單細(xì)胞懸液制備儀；

瑞沃德 HJ-400 加熱套；

瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒；

瑞沃德 SCT-100組織處理管；

70μm 細(xì)胞濾器；

瑞沃德眼科手術(shù)器械；

細(xì)胞培養(yǎng)耗材、移液槍等。

實(shí)驗(yàn)步驟

1、按照說(shuō)明書(shū)要求，混合配置酶mix并37℃水浴激活。

2、剝離成年鼠（P>7）腦組織，暫存至盛有HBSS（含Ca2+和Mg2+）的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷輕輕地將腦組織的血管盡可能去除。

盡可能剔除腦組織上的血管
 

3、將腦組織和酶mix放于組織處理管中，用剪刀將全腦簡(jiǎn)單剪成4塊。
4、將組織處理管倒置至單細(xì)胞懸液制備儀上，安裝加熱套，運(yùn)行程序 M_ABrain_Heater_2。

 

5、潤(rùn)濕細(xì)胞濾器，過(guò)濾細(xì)胞懸液樣本，300×g ，離心10 min。

使用細(xì)胞篩過(guò)濾雜質(zhì)

6、轉(zhuǎn)移細(xì)胞樣本至15mL離心管，加入去碎片試劑后混勻，上層鋪預(yù)冷的PBS，3000×g， 4℃，升速為5，降速為3，離心10min，保留下層細(xì)胞后洗滌收集。
 

去除碎片，收集下層細(xì)胞

7、裂紅操作（可選）。
8、細(xì)胞計(jì)數(shù)及流式檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀處理成年小鼠腦組織獲得的細(xì)胞可達(dá)90%，細(xì)胞活性高，不影響下游實(shí)驗(yàn)。瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年腦組織溫和酶解試劑盒，可用于成年大鼠或小鼠(P>7)全腦組織的單細(xì)胞懸液制備，可支持腦內(nèi)所有神經(jīng)及非神經(jīng)細(xì)胞的分離。