ABT-737 是一種 BH3 模擬物，是一種有效的 Bcl-2、Bcl-xL 和 Bcl-w 抑制劑，EC50 分別為 30.3 nM、78.7 nM 和 197.8 nM。ABT-737 誘導 BCL-2/BAX 復合物的破壞和 BAK 依賴性但不依賴 BIM 的內(nèi)在凋亡途徑激活。ABT-737 誘導自噬，并且具有用于急性髓系白血病 (AML) 研究的潛力。

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ABT-737抑制劑的生物活性

體外研究

ABT-737 與 BCL-2、BCL-XL 和 BCL-W 具有高親和力 (Ki<1 nM)，但與其他抗凋亡 BCL-2 家族成員（包括 MCL-1 和 BFL-1）的結(jié)合力較弱 (Ki>460 nM)。ABT-737 與 BCL-XL 和 BCL-2 的 BH3 結(jié)合槽結(jié)合。

ABT-737（100 nM；1-72 小時）誘導 HL-60 細胞凋亡并與化療產(chǎn)生協(xié)同作用。

ABT-737（5、7.5、10 μM；72 小時）導致約 80% 的 HCT116 細胞死亡。BAX 敲除變體對 ABT-737 具有完全抗性。

ABT-737 對細胞周期分布沒有影響。ABT-737 破壞 BCL-2/BAX 異二聚化并誘導 HL-60 白血病細胞中的 BAX 構(gòu)象變化。

ABT-737 可誘導敏感細胞中 BAX/BAK 依賴性最大 O2 消耗率受損。MCF10A 細胞中穩(wěn)定的 BCL-2 過表達可誘導 ABT-737 敏感的死亡狀態(tài)。ABT-737 可誘導 B 細胞淋巴瘤細胞中劑量依賴性最大 O2 消耗率受損。

體內(nèi)研究

ABT-737（20、30 mg/kg/天；腹腔注射；持續(xù) 21 天）在 20 和 30 mg/kg 劑量水平下分別可抑制 4 至 6 周齡 CB.17 Scid 小鼠（患有人類白血病 KG-1 細胞）的白血病負擔 48% 和 53%。

ABT-737 顯著延長了這種惡性白血病模型中小鼠的生存期。

ABT-737抑制劑的動物實驗參考方法

激酶測定

為了確定GST-BCL-2家族蛋白與FITC標記的BIM BH3結(jié)構(gòu)域（FITC-Ahx-DMRPEIWIAQELRRIGDEFNAYYAR）的結(jié)合親和力，進行如下FPAs實驗。簡而言之，將100 nM GST-BCL-2家族融合蛋白在PBS中與ABT-737的系列稀釋液孵育2分鐘。然后，加入20 nM FITC-BIM BH3肽（FITC-Ahx-DMRPEIWIAQELRRIGDEFNAYYAR）。使用96孔黑板，通過Analyst TM AD Assay檢測系統(tǒng)在10分鐘后測量熒光偏振值。IC50值使用GraphPad Prism軟件進行確定。

MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。

細胞測定

將細胞用ABT-737、ABT-263或載體（DMSO）處理4小時，在XF24測定培養(yǎng)基中（6×10^4 MCF10A細胞，請參見下面的培養(yǎng)基成分）或RPMI 1640培養(yǎng)基中（1×10^6 B細胞淋巴瘤細胞），通過Annexin-V結(jié)合/PI排除或亞二倍體核確定法分析細胞凋亡。FACS分析在Becton Dickinson FACScan或FACScalibur儀器上進行。數(shù)據(jù)分析使用CellQuest軟件。

MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。

動物給藥

對于腹腔注射（i.p.）給藥，將1 g/mL ABT-737的DMSO儲備溶液添加到30%丙二醇、5% Tween 80和65% D5W（5%的葡萄糖水溶液）（pH 4−5；DMSO最終濃度≤ 1%）的混合物中。注射FD/ΔRaf-1:ER細胞的小鼠接收ABT-737（20和30 mg/kg/小鼠，每天腹腔注射21天，從細胞注射后的第1天開始（每組n=9-10只小鼠））或載體或不處理（對照）；注射人KG-1細胞的小鼠在細胞注射后第18天開始接受30 mg/kg的ABT-737。對于FD/ΔRaf-1:ER-luc細胞的非侵入性成像，麻醉的小鼠注射150 mg/kg的D-luciferin，并放置在體內(nèi)成像系統(tǒng)中進行成像，總成像時間為2分鐘。

MCE并未獨立確認這些方法的準確性，僅供參考。