AG490是酪氨酸激酶抑制劑，其抑制EGFR，Stat-3 和 JAK2/3。

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AG490抑制劑的生物活性

體外

AG490通過選擇性阻斷JAK2來抑制Stat-3的活化。 AG490用于選擇性抑制JAK / Stat-3活化。 在10μM的劑量下，Stat-3磷酸化降低> 95％并維持細胞活力。 劑量為10μM的AG490導致EGF刺激的A431細胞中pStat-3降低> 95％，對Stat-3質(zhì)量沒有影響。 AG490是JAK3 / STAT，JAK3 / AP-1和JAK3 / MAPK途徑的有效抑制劑及其細胞后果。 AG490以劑量依賴性方式消除IL-2誘導的[3H]胸苷摻入，顯示IC 50為25μM。 AG490有效抑制T細胞中IL-2介導的增殖，結(jié)果不同于先前的研究，該研究顯示該藥物誘導ALL細胞凋亡，同時對有絲分裂原刺激的正常T細胞的生長沒有明顯影響。

體內(nèi)

AG490顯著抑制1型糖尿病（T1D）的發(fā)展（p = 0.02，p = 0.005;在兩個不同的時間點）。 用AG490（1mg /小鼠）對新診斷的糖尿病NOD小鼠進行單藥治療，顯著導致治療動物（n = 23）的疾病緩解，與絕對無能力相比（0％; 0/10，p = 0.003，Log-rank檢驗） ）停藥后，DMSO和持續(xù)的血紅素血癥維持數(shù)月。 AG490（1-10μg）以劑量依賴性方式顯著減弱?-角叉菜膠誘導的熱痛覺過敏。 AG490還可減少機械痛覺過敏

AG490抑制劑的實驗參考方法

細胞分析

使用CellTiter 96試劑盒進行比色細胞增殖測定。 簡言之，將A431細胞接種在96孔板（2000個細胞/孔）中，并在補充有10％FCS的DMEM / HAM F-12中培養(yǎng)24小時。 將細胞在無血清培養(yǎng)基中孵育24小時。 將EGF（10ng / mL）加入所有孔中。 單獨或組合加入Tyrphostin AG1478（0.25mM）和AG490（10mM），將培養(yǎng)物溫育適當?shù)臅r間。 吸出培養(yǎng)基并向每個孔中加入CellTiter 96 Aqueous One Solution Reagent（20μL）。 將板在37℃溫育最多1小時，并使用96孔板讀數(shù)器在490nm處記錄吸光度。 對于單一試劑和組合研究，數(shù)據(jù)來源于至少三次獨立實驗（一式三份）。 測定Tyrphostin AG1478（EGFR抑制劑）和AG490（JAK / STAT抑制劑）的IC 50值。 使用Calucsyn軟件程序[1]量化組合的生長抑制作用。

MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。 它們僅供參考。

動物研究

小鼠

使用雌性NOD / LtJ，NOD.Scid和BALB / c小鼠。 通過i.p途徑將一小瓶含有5mg AG490的化合物注射到5只小鼠（1mg /小鼠）中。 對照組在相同的方案和條件下接收相同體積的載體。

大鼠

使用總共28只雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300g）。 在?-角叉菜膠注射后48小時，在大鼠中進行實驗。 在劑量反應研究中隨機包括總共4組（n = 6）的大鼠。 第1組是載體對照，其接受100μL的i.pl. 在鹽水中注射3.5％DMSO。 組2-4注射3種不同劑量的AG490（1,5或10μg）。 為了研究納洛酮對AG490誘導的抗傷害感受的作用，觀察到另一組大鼠（組5; n = 4）。 第5組與AG490（10μg）和納洛酮（10μg）共同施用。 這些藥物是i.pl. 體積為100μl。 如前所述，在處理后4小時觀察到AG490的體內(nèi)藥理學作用。 因此，行為測試在治療前（基線評估）和治療后4小時進行。 首先，對大鼠進行熱痛覺過敏試驗; 10分鐘后，對同一組大鼠進行爪壓測試。 所有實驗均在上午8:00至下午2:00之間進行。 減少晝夜變化的混雜影響，所有程序都以盲目的方式進行。