DAPT (GSI-IX) 是一種有效的，口服活性的 γ 分泌酶 (γ-secretase) 抑制劑，對總 amyloid-β (Aβ) 和 Aβ42 的 IC50 分別為 115 nM 和 200 nM。DAPT 抑制 Notch 1 信號傳導(dǎo)并誘導(dǎo)細(xì)胞分化。DAPT 還可誘導(dǎo)細(xì)胞自噬 (autophagy) 和凋亡 (apoptosis)。DAPT 具有神經(jīng)保護(hù)活性，并可用于自身免疫性和淋巴增生性疾病，退化性疾病和癌癥的研究。

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DAPT是γ分泌酶抑制劑的生物活性

體外研究

DAPT 抑制 Aβ 的產(chǎn)生超過 90%，僅適度降低培養(yǎng)基中的 APPβ。盡管 DAPT 處理后 APPβ 減少了約 30%，但這種作用不依賴于濃度，并且可以通過去除 DAPT 來逆轉(zhuǎn)

DAPT 的濃度 (0、25、50 和 75 μM) 和 γ-分泌酶產(chǎn)生的 Notch 1 片段 Val1744-NICD 在 48 小時后以劑量依賴性方式降低 (P <0.01)。在 50 μM 濃度下，γ-分泌酶的激活幾乎完全被 DAPT 抑制

體內(nèi)研究

將 DAPT 施用于 PDAPP 小鼠 (100 mg/kg sc)，并檢查大腦皮層中的 DAPT 和 Aβ 水平。處理后 3 小時大腦中達(dá)到 490 ng/g 的峰值 DAPT 水平，并且在前 18 小時內(nèi)持續(xù)超過 100 ng/g (——200 nM) 的水平。這些 DAPT 的腦濃度超過了其降低神經(jīng)元培養(yǎng)物中 Aβ 的 IC50 (115 nM)，并產(chǎn)生了穩(wěn)健和持續(xù)的藥效學(xué)效應(yīng)

DAPT 通過下調(diào)大鼠Notch 1和核因子kappa B的表達(dá)來保護(hù)大腦免受腦缺血。Western blot 分析還顯示，DAPT (0.03 mg/kg) 組 Notch 1 和 NF-κB 表達(dá)顯著降低 (P<0.05 vs. MCAO 組)

實驗參考方法

細(xì)胞測定

人胚腎細(xì)胞（HEK 293），轉(zhuǎn)染了APP751基因，用于常規(guī)的Aβ減少測試。細(xì)胞在96孔板中鋪板，并在補充10%熱滅活胎牛血清的杜培氏修飾鷹培養(yǎng)基（DMEM）中過夜附著。細(xì)胞在37°C下用DAPT（0，0.4，2，10，50和250 nM）預(yù)處理2小時，然后吸去培養(yǎng)基，施加新鮮的化合物溶液。在額外的2小時處理期后，抽取條件培養(yǎng)基并通過針對總Aβ的夾心ELISA（266-3D6）進(jìn)行分析。Aβ生成的減少相對于用0.1% DMSO處理的對照細(xì)胞進(jìn)行測量，并以抑制率的百分比表示。來自至少六個劑量的重復(fù)數(shù)據(jù)使用XLfit軟件擬合到四參數(shù)邏輯模型，以確定效力。

MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

動物給藥

小鼠

三至四個月大的雜合PDAPP轉(zhuǎn)基因小鼠過表達(dá)淀粉樣前體蛋白(APPV717F)突變形式。每個治療組（n=10）由相同數(shù)量的年齡匹配雄性和雌性動物組成，這些動物在治療前禁食過夜。治療組和對照組均以10 mL/kg的體積給予DAPT或僅給予載體。處理組織并進(jìn)行所有Aβ和APP測量。取出大腦后，單側(cè)皮層被勻漿、離心，超natant用于Aβ測量。另一側(cè)的皮層則快速冷凍以分析化合物水平。Aβ水平以濕組織重量的ng/g表示，百分比減少相對于載體處理對照動物的平均Aβ水平計算。數(shù)據(jù)使用Mann-Whitney非參數(shù)統(tǒng)計分析以評估顯著性。

大鼠[3]

使用雄性斯普拉格-道利大鼠（260-290克）。DAPT溶液在缺血再灌注手術(shù)（MCAO）后立即立體定位注射入側(cè)腦室（LV）。對LVs的立體定位注射是在距離bregma -0.8 mm (前后)，±1.5 mm (內(nèi)外) 和−4.5 mm (上下) 的坐標(biāo)下進(jìn)行。30只大鼠隨機分為三個操作組（每組10只）：假手術(shù)組，接受等體積PBS而不進(jìn)行MCAO；MCAO組，在MCAO后接受等量PBS；DAPT組，在MCAO后接受0.03 mg/kg DAPT。術(shù)后24小時評估第一次神經(jīng)功能，48小時后評估第二次神經(jīng)功能。同時，測量并比較不同組之間的大腦水分含量和梗死體積。

MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。