Bestatin烏苯美司 (Ubenimex) 是 CD13 (Aminopeptidase N)/APN 和 leukotriene A4 hydrolase 抑制劑，常用于癌癥研究。

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生物活性

體外研究

Bestatin烏苯美司增強(qiáng)了全反式維甲酸（ATRA）誘導(dǎo)的分化，并抑制了在A(yíng)TRA敏感的急性早幼粒細(xì)胞白血病（APL）NB4細(xì)胞中由ATRA驅(qū)動(dòng)的p38 MAPK磷酸化。Bestatin烏苯美司無(wú)法逆轉(zhuǎn)在A(yíng)TRA耐藥的APL MR2細(xì)胞中的分化阻滯。與抗CD13抗體WM-15結(jié)合的CD13導(dǎo)致p38 MAPK的磷酸化，減少了Bestatin烏苯美司對(duì)p38 MAPK磷酸化的抑制，并完全消除了Bestatin烏苯美司對(duì)NB4細(xì)胞中ATRA誘導(dǎo)分化的增強(qiáng)作用[2]。經(jīng)過(guò)Bestatin烏苯美司（600 μM）處理的細(xì)胞在細(xì)胞周期中的進(jìn)展速度減緩，這是由于細(xì)胞生長(zhǎng)速率和細(xì)胞分裂頻率降低。Bestatin烏苯美司抑制了黏菌(D. discoideum)中有絲分裂的頻率及其固有的多核性，在0-600 μM濃度下對(duì)黏菌細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性。Bestatin烏苯美司分別抑制PsaA-GFP和GFP表達(dá)細(xì)胞裂解液中的氨肽酶活性69.39%和39.93%[4]。

體內(nèi)研究

Bestatin烏苯美司（20 μM）顯著降低糖尿病小鼠中CD13的表達(dá)，并且與糖尿病車(chē)輛處理的小鼠相比，MMP-9特異性明膠酶帶密度顯著抑制。Bestatin烏苯美司處理顯著抑制糖尿病小鼠中VEGF和肝素酶的表達(dá)。玻璃體內(nèi)注射Bestatin烏苯美司顯著下調(diào)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1α和VEGF的表達(dá)。此外，糖尿病小鼠視網(wǎng)膜中上調(diào)的肝素酶表達(dá)被玻璃體內(nèi)注射最佳坦顯著抑制[1]。在抗原增強(qiáng)的對(duì)SRBC的體液免疫反應(yīng)之前，給予Bestatin烏苯美司（10、1和0.1 mg/kg，腹腔注射）治療，可以增加產(chǎn)生溶血性抗SRBC抗體（PFC）的脾細(xì)胞數(shù)量，以及2-ME耐受的血清凝集素滴度（在0.1 mg/kg劑量下）。在環(huán)磷酰胺注射后，每隔一天將Bestatin烏苯美司（1和0.1 mg/kg）給小鼠五次，并不會(huì)改變?cè)撍幬飳?duì)于PFC數(shù)量的抑制作用，甚至在抗原刺激后第7天以1 mg/kg劑量時(shí)，進(jìn)一步減少總的抗SRBC凝集素[3]。

實(shí)驗(yàn)參考方法

激酶測(cè)定

細(xì)胞被收集、洗滌并在 NP-40 裂解緩沖液中裂解（50 mM Tris-HCl [pH 7.5], 150 mM NaCl, 0.5% NP-40）。使用布拉德福德法定量總細(xì)胞蛋白，并制備 1 mg/mL 蛋白質(zhì)分裝。將 10 微升的總細(xì)胞蛋白與 290 微升底物溶液（0.1 mg/mL 二硫蘇糖醇 [DTT]，0.1 mg/mL 白蛋白和 1 mM 丙氨酸-β-萘胺）混合。經(jīng)過(guò) 15 分鐘和 30 分鐘后進(jìn)行熒光測(cè)定（340 nm 激發(fā)，400 nm 發(fā)射）。15 分鐘和 30 分鐘測(cè)定結(jié)果之間的斜率用于表示氨肽酶活性。在熒光氨肽酶測(cè)定之前，總細(xì)胞蛋白與最佳素、阿馬斯坦、噻唑霉素、EDTA 和/或 ZnCl2 預(yù)孵育 20 分鐘。

細(xì)胞測(cè)定

正在生長(zhǎng)的細(xì)胞（1×10^6 到 2×10^6 細(xì)胞/mL）被稀釋至 1.0×10^3 細(xì)胞/mL，并轉(zhuǎn)移（3 mL）到一個(gè) 12 孔多孔板的孔中（直徑 2.5 厘米/孔）。細(xì)胞與 0、10、50、100、300 或 600 μM 最佳素處理，并在 21°C 下以 180 rpm 搖動(dòng)培養(yǎng) 48 小時(shí)。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在 0、24 和 48 小時(shí)后測(cè)量細(xì)胞密度。 相關(guān)產(chǎn)品推薦：Bestatin烏苯美司 hydrochloride鹽酸烏苯美司

MCE 未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

動(dòng)物給藥

最佳素溶解在 PBS 中。該試劑（劑量為 10、1 和 0.1 mg/kg）被腹腔注射到未經(jīng)環(huán)磷酰胺處理的小鼠體內(nèi)，注射 5 次或 10 次，每次間隔 24 小時(shí)，在 SRBC 免疫前。小鼠在最后一次注射最佳素后 24 小時(shí)進(jìn)行免疫。通過(guò)在 SRBC 免疫前 12 天，以 350 mg/kg 的劑量單次腹腔注射環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)藥理免疫抑制。在環(huán)磷酰胺免疫抑制的小鼠中，以 1 和 0.1 mg/kg 的劑量腹腔注射最佳素，5 次每 48 小時(shí)一次或 10 次每 24 小時(shí)一次，直到 SRBC 免疫。最佳素的第一劑量在環(huán)磷酰胺注射 24 小時(shí)后給藥，而最后一劑在 SRBC 免疫前 24 小時(shí)注射。

參考文獻(xiàn)

[1]. Hossain A, et al. Protective effects of Bestatin烏苯美司 in the retina of streptozotocin-induced diabetic mice. Exp Eye Res. 2016 Aug;149:100-6

[2]. Qian X, et al. Inhibition of p38 MAPK Phosphorylation Is Critical for Bestatin烏苯美司 to Enhance ATRA-Induced Cell Differentiation in Acute Promyelocytic Leukemia NB4 Cells. Am J Ther. 2016 May-Jun;23(3):e680-9.

[3]. Lis M, et al. The effects of Bestatin烏苯美司 on humoral response to sheep erythrocytes in non-treated and cyclophosphamide-immunocompromised mice. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2013 Feb;35(1):133-8

[4]. Poloz Y, et al. Bestatin烏苯美司 inhibits cell growth, cell division, and spore cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2012 Apr;11(4):545-57