ProPac 3R單分散離子交換色譜柱分析挑戰(zhàn)性蛋白治療藥物
徐培輝、史俊霞
ProPac 3R
近年來生物制藥發(fā)展迅速，蛋白藥物大多存在翻譯后修飾且種類復(fù)雜多樣，因此研發(fā)過程中的質(zhì)量控制顯得尤為重要，其中電荷異質(zhì)性是關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）之一，其可能影響生物制品的療效，甚至有可能帶來意想不到的副作用，從而影響藥品的安全性和有效性，所以在抗體藥物開發(fā)過程中選擇一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的電荷異質(zhì)性檢測(cè)分析方法，是控制和穩(wěn)定抗體藥物生產(chǎn)質(zhì)量的有效手段。離子交換色譜技術(shù)廣泛用于生物制藥的開發(fā)以及蛋白藥物電荷變異體的分離。賽默飛離子交換色譜柱，從ProPac WCX-10開始，不斷致力于為客戶帶來分析流程中的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
ProPac 3R進(jìn)一步完善應(yīng)用方法，提供更優(yōu)的分離度結(jié)果，并采用單分散填料（圖1）解決批次重現(xiàn)性問題。它采用生物惰性材料設(shè)計(jì)，可以為蛋白質(zhì)和AAV等分析提供可重復(fù)、高分辨率和耐用的強(qiáng)陽/陰離子交換色譜分離，尤其在具有挑戰(zhàn)性的多抗、融合蛋白、ADC及復(fù)方共制劑等新興治療藥物電荷異質(zhì)體分析中提供更高分辨率和重現(xiàn)性。“3R”取至穩(wěn)健性（Robustness）、重現(xiàn)性（Reproducibility）、分辨率（Resolution）英文的首字母，突出體現(xiàn)了3R的性能優(yōu)勢(shì)，孔徑也從傳統(tǒng)的10μm升級(jí)至小粒徑的3μm。
圖1 3μm單分散ProPac 3R粒子（左）與3μm多分散粒子（右）的SEM圖像
雙特異性抗體
圖2展示在鹽梯度條件下，ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統(tǒng)單分散強(qiáng)陽離子交換色譜柱在分析雙抗電荷異質(zhì)體中的對(duì)比，ProPac 3R不僅在分辨率上有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在響應(yīng)上也有顯著優(yōu)勢(shì)。
圖2 ProPac 3R SCX色譜柱與多分散強(qiáng)陽離子交換在雙抗的分離譜圖
融合蛋白
圖3展示在鹽梯度條件下，ProPac 3R SAX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統(tǒng)單分散強(qiáng)陰離子交換色譜柱在分析融合蛋白電荷異質(zhì)體中的對(duì)比，ProPac 3R在各組分分離上有較大的提升，更有利于后期制備后MS表征。
圖3 ProPac 3R SAX色譜柱與多分散強(qiáng)陰離子交換在融合蛋白的分離譜圖
抗體偶聯(lián)藥物ADC
圖4展示在商品化CX-1 PH buffer條件下，ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統(tǒng)單分散強(qiáng)陽離子交換色譜柱在分析ADC電荷異質(zhì)體中的對(duì)比，ProPac 3R在特別難分的酸性變異體中有更高的分辨率，為QC放行提供更穩(wěn)定的方法。
圖4 ProPac 3R SCX色譜柱與多分散強(qiáng)陽離子交換在ADC的分離譜圖
復(fù)方共制劑
復(fù)方共制劑是有兩種及以上蛋白藥物按照不同比例組成的，蛋白比例和每種蛋白酸堿變異體的比例是需要檢測(cè)的，這給離子交換液相色譜法帶來巨大的挑戰(zhàn)。圖5展示在商品化CX-1 PH buffer條件下，ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm) 不僅得到了兩種不同蛋白比值與理論值一致的結(jié)果，而且可以得到每種蛋白各自酸堿變異體的比值。
圖5 ProPac 3R SCX色譜柱在復(fù)方共制劑的分離譜圖
結(jié)論ProPac 3R單分散色譜柱在多特異性抗體、ADC、融合蛋白和復(fù)方共制劑分析中均表現(xiàn)出優(yōu)越的分離性能和很高的靈敏度，且單分散的填料保證了批與批之間結(jié)果的穩(wěn)定性，方法耐用性的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提升。
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