倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于多路復(fù)用生物標(biāo)志物光纖光學(xué)傳感器研究

瀏覽次數(shù)：653　發(fā)布日期：2024-4-23　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

【Matter】明美倒置熒光顯微鏡助力四川大學(xué)研究多路復(fù)用生物標(biāo)志物光纖光學(xué)傳感器論文研究

2022年8月16日，英國帝國理工學(xué)院張雨倩、胡余冰博士和Ali K. Yetisen教授團隊與四川大學(xué)姜楠研究員團隊合作在Matter上發(fā)表一篇題為“Multiplexed optical fiber sensors for dynamic brain monitoring”的研究成果。

該成果報道了一種集成了可編程的AI 預(yù)測平臺的多路復(fù)用生物標(biāo)志物光纖光學(xué)傳感器。該傳感器能夠?qū)崟r且連續(xù)探測腦脊液中多種生物標(biāo)志物的水平，并診斷和動態(tài)監(jiān)測顱腦損傷的不同階段。

圖1：用于腦生物標(biāo)志物檢測的多路復(fù)用光纖光學(xué)傳感器的示意圖。

為實現(xiàn)以上目標(biāo)，該研究團隊在Y型光纖的頂端連接四種不同的傳感薄膜，用于同時檢測四種不同的生物標(biāo)志物（圖 1A）。研究通過在Y型光纖一端連接光源，另一端連接光譜儀進行反射光譜分析，以實現(xiàn)生物標(biāo)志物濃度的讀取和分析（圖 1B）。為了消除四種傳感器之間的串?dāng)_并提供生物標(biāo)志物的高精度和定量讀數(shù)，利用反射光譜的特征開發(fā)和優(yōu)化了基于機器學(xué)習(xí)的回歸模型。四種光學(xué)傳感器是基于熒光和比色的方法，其工作機制是通過傳感膜和生物標(biāo)志物之間的相互作用來改變薄膜的光物理性質(zhì)（圖1C-i）。為了實現(xiàn)長期穩(wěn)定的監(jiān)測，傳感器被封裝在透明的二氧化硅薄膜中（圖 1C-ii），可避免指示劑滲漏，并保持對生物標(biāo)志物的高滲透性。四種傳感薄膜被切割成1/4 圓形，并放置在光纖頂端上方 4 mm 處，玻璃微纖維制成的反射隔離膜加在傳感膜的表面以增強反射信號，并阻擋背景噪聲。

該研究團隊利用多路復(fù)用傳感器對人工腦脊液（aCSF）的pH、腦氧含量（DO）、溫度和葡萄糖進行了同時檢測，測量結(jié)果如下。如圖所示，該光纖傳感器在進行多參量同時監(jiān)測的時候區(qū)分pH、DO、溫度和葡萄糖，同時該傳感器具有良好的重復(fù)性，可以反復(fù)使用。并且，傳感薄膜在不同的生理環(huán)境中具有肉眼可見的顏色變化，證實了該傳感器可以有效地檢測aCSF中的生物標(biāo)志物（圖2）。

圖2：多路復(fù)用光纖光學(xué)生物傳感器對pH、溫度、腦氧（DO）、葡萄糖傳感檢測結(jié)果。

在多參數(shù)的實驗中發(fā)現(xiàn)該四路信號無法避免的存在了信號干擾和輸出重疊的現(xiàn)象，使得pH、溫度和葡萄糖傳感的敏感性有一定的降低，也難以只利用某單一波長的值對檢測參數(shù)進行計算（圖3A）。于是該研究團隊提出了利用機器學(xué)習(xí)算法來通過所采集到的光譜信息建立四個模型來分別對四種參量進行預(yù)測（圖3B）。為了更好的訓(xùn)練效果，該研究團隊從光譜提取了10個光譜特征來訓(xùn)練模型，其中包括每個參量的敏感波長對應(yīng)的強度，還有波峰波谷等特征。為了矯正溫度對氧信號的影響，在模型訓(xùn)練時，溫度也作為其中一個特征對氧氣模型進行訓(xùn)練。在比較多種模型效果后，該研究團隊發(fā)現(xiàn)利用貝葉斯RIGI回歸算法對四個參量預(yù)測效果好。該團隊利用五折交叉驗證方法對模型效果進行了驗證，結(jié)果顯示pH、腦氧含量、溫度和葡萄糖預(yù)測模型的R2分別達(dá)到了0.84、0.93、0.94、0.94（圖3C-F）。

為了進一步檢測該多路復(fù)用光纖光學(xué)傳感器的有效性和臨床應(yīng)用效果，該研究團隊用羊腦進行了離體組織驗證。檢測前先對羊腦進行了清洗處理，將其自帶的腦脊液等洗去。然后研究人員仿照實際情況下健康人群、TBI前期、TBI中期和TBI后期的病人腦脊液中pH、腦氧、溫度和葡萄糖的含量配制了相應(yīng)的aCSF，并把羊腦浸泡在腦脊液中進行疾病的模擬監(jiān)測。在連續(xù)的監(jiān)測中，該多路復(fù)用傳感器可以實現(xiàn)對不同階段腦脊液的測量，成功準(zhǔn)確的計算出了這四種生物標(biāo)志物的含量，而不同階段之間的變化也都能在3分鐘之內(nèi)檢測出來，可以準(zhǔn)確反映出疾病之間不同的階段的切換，進一步證實了該系統(tǒng)具有重要的臨床應(yīng)用前景（圖3G）。

圖3：基于機器學(xué)習(xí)模型的體外TBI腦監(jiān)測模型研究。

圖4：光纖傳感器生物相容性和細(xì)胞增殖研究。

（該圖所用顯微鏡為廣州明美Mshot MF53-N倒置熒光顯微鏡）

該研究成果使用到的儀器設(shè)備有：倒置熒光顯微鏡MF53-N，采用優(yōu)異的無限遠(yuǎn)消色差獨立校正光學(xué)系統(tǒng)，配置長工作距離平場消色差物鏡與大視野目鏡。好的弱熒光成像，采用轉(zhuǎn)盤式熒光切換方式，可配置UV、V、B、G、Y、R等在內(nèi)的多種熒光，可觀測DAPI、FITC、TRITC、Alexa Fluor系列、Cy3系列等常見熒光染料，在CTC檢測、FRET、細(xì)胞免疫等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

01先進的模塊化設(shè)計

配備6孔熒光附件

配備6孔熒光附件，更換拆卸便捷，采用轉(zhuǎn)盤式結(jié)構(gòu)設(shè)計，切換方便，能同時滿足多種熒光的觀察需求

熒光照明裝置

長壽命的寬光譜大功率LED光源，不僅亮度均勻而且維護簡便，光譜覆蓋350nm-760nm波長范圍，可即開即關(guān)，無需預(yù)熱。

02滿足多種解決方案

明場觀察

采用LED照明，高亮度、低輻射，光路無需調(diào)節(jié)，超長的使用壽命，避免頻繁更換，節(jié)能環(huán)保。

熒光觀察

可配置UV、V、B、G、Y、R等多種熒光，可觀測DAPI、FITC、TRITC、Alexa Fluor系列、Cy3系列等常見熒光染料，在CTC檢測、FRET、細(xì)胞免疫等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

相差觀察

推拉式相差環(huán)板設(shè)計，操作簡單方便，相差成像均勻，可根據(jù)需求靈活更換對應(yīng)倍數(shù)的相差環(huán)

明美是一家專注顯微成像產(chǎn)品研發(fā)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，是中國儀器儀表行業(yè)協(xié)會光學(xué)分會理事單位，醫(yī)療器械顯微鏡生產(chǎn)及經(jīng)營廠家。
公司一直堅持誠信經(jīng)營，用心服務(wù)，提供顯微成像解決方案。為教育、科研、醫(yī)藥、工業(yè)檢測等廣大客戶提供穩(wěn)定的產(chǎn)品與服務(wù)。
始終以客戶需求為主，以品質(zhì)為根本，以創(chuàng)新為方向，推動顯微行業(yè)的數(shù)字化、電動化、智能化，為顯微領(lǐng)域的國產(chǎn)化進程貢獻(xiàn)力量。
您若對倒置熒光顯微鏡有興趣或存在疑惑，明美光電歡迎您咨詢，期待與您相約！

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