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正確更換細胞培養(yǎng)基類型的情況分析與方法介紹

瀏覽次數(shù):2122 發(fā)布日期:2022-11-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

選擇一種合適的細胞培養(yǎng)基是每個實驗猿的必get技能。不同類型的培養(yǎng)基可以支持同一種細胞的生長,怎么選擇最佳款?假如自己的培養(yǎng)基剛好用完了,可以借別人的培養(yǎng)基用用嗎?剛買了細胞,能繼續(xù)使用以前剩余的培養(yǎng)基嗎?


間充質(zhì)干細胞可以用基礎培養(yǎng)基,加常規(guī)血清培養(yǎng)嗎?

間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)條件嚴格,對使用的血清和添加物都非常敏感,并非單純的DMEM或者F12等基礎培養(yǎng)基加常規(guī)血清所能替代。所以在培養(yǎng)細胞前,需要考慮該細胞培養(yǎng)是否需要添加特殊的成分,并且要做足預實驗,選取最適合細胞生長的培養(yǎng)體系。

如賽業(yè)Oricell®提供的各類干細胞專用培養(yǎng)基,經(jīng)16年干細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的篩選優(yōu)化,培養(yǎng)基添加了適合干細胞生長的優(yōu)級胎牛血清,以及干細胞相關(guān)生長因子和非必須氨基酸能滿足滿足干細胞傳代增殖生長中需要的特殊養(yǎng)分。

 

圖依次為:成人骨髓間充質(zhì)干細胞,成人脂肪間充質(zhì)干細胞,人牙髓間充質(zhì)干細胞。

用專用培養(yǎng)基養(yǎng)出來的干細胞有一定極性漩渦狀、立體生長、細胞呈梭形、成纖維樣排列,好的品質(zhì)經(jīng)得起客戶長期檢驗。
 

細胞復蘇后換了一種培養(yǎng)基,影響大嗎?

短期內(nèi)接觸不同培養(yǎng)基對絕大部分細胞來講影響并不大。比如,我們?nèi)粘9ぷ髦型瑫r操作的細胞有很多,如果需要同時復蘇多株細胞,用同一種培養(yǎng)基洗滌是完全沒有問題的,但是長期培養(yǎng)就不行了。

我們培養(yǎng)的細胞長期適應了某一種培養(yǎng)體系,代謝已經(jīng)有了適應性,冒然更換培養(yǎng)基可能會對細胞形態(tài)、增殖和蛋白表達產(chǎn)生影響。不同廠家的培養(yǎng)基,即使宣稱同某一個細胞適用,配方也略有差異。細胞庫不同,建系的培養(yǎng)信息不同,一般廠家會建議使用自供的配套培養(yǎng)基以獲得理想的培養(yǎng)效果。所以,某一培養(yǎng)體系下的某一株細胞表現(xiàn)型讓我們滿意,如果不是實驗必要,就不要輕易更換培養(yǎng)基種類。
 

不同培養(yǎng)基養(yǎng)同一種細胞,形態(tài)不一樣正常嗎?

這種情況是正常的。如上所述,當細胞培養(yǎng)條件發(fā)生改變時,細胞的性質(zhì)會發(fā)生變化。
 

特殊情況下真必要更換培養(yǎng)基,該如何正確操作呢?

① 在不確定新培養(yǎng)基是否合適細胞生長的情況下,實驗前預先“保種”。

② 直接替換可能會造成細胞死亡,建議逐步進行,密切觀察細胞長勢和形態(tài),讓細胞安全度過“適應期”。

嘗試使細胞慢慢適應新培養(yǎng)基

▷  以1:2的比例傳代到新培養(yǎng)瓶中。

▷ 如果細胞形態(tài)一致,傳代培養(yǎng)下一代細胞時,細胞1:2分配,培養(yǎng)基采用1:3的比例(25%原培養(yǎng)基,75%新培養(yǎng)基)。

▷ 如果細胞形態(tài)一致,傳代培養(yǎng)下一代細胞時,細胞1:2分配,培養(yǎng)基采用1:7的比例(12.5%原培養(yǎng)基,87.5%新培養(yǎng)基)。

▷ 如果細胞形態(tài)一致,傳代培養(yǎng)下一代細胞時,細胞1:2分配,培養(yǎng)基全部換新培養(yǎng)基。

有時候傳一代不能真實反映細胞適應了新培養(yǎng)環(huán)境,最好是每進行一次更換多傳個一兩代。

③ 更換培養(yǎng)基后優(yōu)先使用同品牌、同等級、同批次的血清,或者預篩選合適的血清。
 

若已經(jīng)儲備了昂貴的胎牛血清,想自行配置培養(yǎng)基又該如何操作呢?


① 詢問廠家該細胞推薦的培養(yǎng)體系,如ATCC來源細胞可直接查詢該細胞的培養(yǎng)條件介紹和正常形態(tài)。
② 翻閱文獻配方,要不要添加其他因子之類的特殊成分,但要注意該文獻的研究條件是否與你實驗相符。
③ 配制幾種不同類型的培養(yǎng)基,使用同一批次細胞進行對比,觀察形態(tài)差異;蛸徺I少量其他成品化培養(yǎng)基,與自己配制的進行對比,觀察形態(tài)差異。
④ 現(xiàn)行條件下的細胞生長緩慢,可以適當增加血清比例。
 

賽業(yè)OriCell®的培養(yǎng)基產(chǎn)品怎樣配制?

完全培養(yǎng)基產(chǎn)品分為非即用型即用型兩類,可按需選用。

非即用型

按比例分裝,使用時只需將基礎培養(yǎng)基、血清、因子等全部混合即可。需要注意,部分成分體積較小、濃度較高,在運輸、凍融過程可能析出或粘附在管壁、管蓋上。配之前,請務必離心后,吹打混勻再吸取。最好在吸取后使用培養(yǎng)基洗滌裝因子的管內(nèi)壁,確保沒有成分損失。

另外,有些成分析出后較難復溶,如L-谷氨酰胺、ITS等,可在37℃水浴內(nèi)震蕩或者吹打溶解。即使還有少量小顆粒無法溶解,請直接加入基礎培養(yǎng)基中,成分濃度低時較易溶解。

即用型
添加了更穩(wěn)定的添加物,省去分裝操作,即開即用。

發(fā)布者:賽業(yè)(蘇州)生物科技有限公司
聯(lián)系電話:400-680-8038
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