隨著工作、生活節(jié)奏加快，壓力增大，焦慮是臨床常見癥狀，過度焦慮可導致焦慮癥、抑郁癥等心理 疾病，嚴重影響人們的生活質量和健康水平。焦慮狀態(tài)動物模型的制作對進一步研究疾病十分重要。 高架十字迷宮（elevated plus maze，EPM）實驗是利 用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開環(huán)境的 恐懼形成矛盾沖突行為來考察動物的焦慮狀態(tài)，是動物焦慮行為學研究中較為經典的測試。但目前對于 EPM實驗的應用并無統(tǒng)一標準。本文通過檢索以往應用這項實驗評價大鼠焦慮狀態(tài)的研究，并進行整理分析，以期為后續(xù)使用該方法評價焦慮大鼠模型提供參考。

01高架十字迷宮的裝置

常用的高架十字迷宮多在溫度、濕度相對穩(wěn)定、進行過遮光處理、安靜的房 間里設置４個高于地面的十字交叉窄臂。十字臂距離地面的高度通常為40-70cｍ，其中50cm的較多，一般不超過75cm。２條開放臂的尺寸 多為45cm以上的長度、寬度為10cm 或15cm，邊 為1cm的臂高。另外兩條多為長寬與開放臂相 同的封閉臂，其臂高多為30cm 或40cm 以上， 僅發(fā)現(xiàn)一項研究中封閉臂的臂高為12cm。４條 臂之間的中央連接區(qū)多為15cm×10cm 或10cm ×15cm的正方形，如圖,A：十字臂距地面的高度 B：開放臂長度 C：開放臂寬度 D：開放臂臂高 E封閉臂臂高 F：中央連接區(qū)

02將大鼠放置入EPM的初始狀態(tài)

高架十字迷宮開始時多將單只實驗大鼠置于迷宮中央平臺區(qū)，大 鼠頭朝向其中一個開放臂或封閉臂，也有研究開始時將大鼠放置于其中一個開放臂，頭朝中央?yún)^(qū)域。

03大鼠提前進入實驗環(huán)境時間

一般提前15min將大鼠放入EPM 實驗房間，使其適應環(huán)境，也有實驗提前1h或2h。

04實驗時長

大多數(shù)文獻中每只大鼠在EPM 實驗時間為5min，少數(shù)研究將時間延長到10min，甚至更長時間。

05高架十字迷宮實驗結果評判方法

EPM實驗過程中，通常由操作者人工或通過迷宮上設置的攝像、使用VisuTrack動物行為分析跟蹤設備（上海欣軟）記錄大鼠進入開放臂次數(shù) （open arm entry，OE）、開放臂停留時間（open arm time，OT）、進入封閉臂次數(shù) （closed arm entry， CE）及封閉臂停留時間（closed arm time，CT），并計算進入開放臂次數(shù) 百分比 ［OE％ ＝ OE／（OE ＋CE）×100％］以及在開放臂 停留時間百分比 ［OT％＝OT／（OT＋CT）×100％］。OE及OT減少反映大鼠焦慮情緒加重。

也有研究在此基礎上增 加了各臂的總出入次數(shù)這一評判指標，以幫助判斷受試大鼠的活動水平。各臂總出入次數(shù)減少表明大鼠活動水平降低，在排除其他因素后，可推測大鼠的 焦慮情緒加重。

06焦慮模型大鼠造模成功實驗結果

在大多數(shù) 使用慢性應激方法制造焦慮模型大鼠的研究中，造 模結束后多將焦慮造模后的大鼠與未進行造模的空白大鼠同時進行EPM 實驗檢測，通過焦慮模型組大鼠在 EPM中的表現(xiàn)與同期空白組對比分析，判定是否造模成功。

07注意事項

• 高架十字迷宮實驗基于大鼠對于開放、無保護以及高懸環(huán)境的恐懼、對新事物的好奇以及天生對黑暗環(huán)境的傾向，形成“探究－規(guī)避”行為沖突，模仿人類的焦慮狀態(tài)。
• 測試過程中若大鼠對開放環(huán)境的探究減少則表明焦慮情緒增加，是經典的動物焦慮行為 測試儀器。但在操作過程中，由于設備以及操作細節(jié)的差別造成實驗結果未能有客觀統(tǒng)一標準，多靠 造模前后比較或與空白組數(shù)據(jù)比較以判斷造模后的大鼠是否存在焦慮情緒。 　　
• 高架十字迷宮距離地面較高，相當于人站在峭壁上， 使實驗大鼠產生恐懼和不安心理。其中高架十字迷宮中的 封閉臂因有一定的遮擋，形成在高懸環(huán)境中的相對 保護，并對光線起一定遮蔽效果，滿足大鼠的嗜暗性傾向；開放臂則造成了大鼠對高懸敞開明亮環(huán)境的 懼怕 與探究天性的矛盾。

在高架十字迷宮實驗中，焦慮狀態(tài)越嚴重的大鼠，對高懸敞開環(huán)境的懼怕愈盛，探究性行為愈少。高架十字迷宮中十字交叉窄臂的寬度會決定開放臂的敞開環(huán)境以及封閉臂的安全感，影響這兩者的差別程度，同時也會決定中央連接區(qū)的面積，間接影響大鼠在中央連接區(qū)的等待時間。開放臂與封閉臂的差別在于封閉臂的臂高，結合大鼠的自身高度考慮，臂高需要達到一定的高度才能形成封閉環(huán)境，給予大鼠安全感，誘導大鼠的探究行為以完成實驗。

將大鼠放置進入高架十字迷宮的初始位置為中央連接區(qū)，頭朝封閉臂則開始實驗時就使其傾向躲避，進入保護環(huán)境，但這一操作可能會使實驗大鼠在實驗全程錯過開放臂。而在初始時大鼠面向開放臂，使高 懸敞開環(huán)境對大鼠起到一定的新奇刺激，讓其陷入 探究與回避的矛盾，更有利于通過進入開放臂的時 間及次數(shù)客觀評價其焦慮程度。若初始狀態(tài)時就將 大鼠放置于開放臂，則高懸敞開環(huán)境可能放大大鼠的懼怕，進而造成實驗結果失真。在進行實驗之前， 大鼠應當提前進入實驗的房間，適應其溫度、濕度以 及光線等環(huán)境情況，避免大鼠突然進入新的實驗環(huán) 境造成的不適影響實驗結果。在高架十字迷宮實驗中，如果實驗時間過短，未等實驗大鼠適應環(huán)境就提取數(shù) 據(jù)，可能造成實驗結果不真實；而實驗時間過長，可能導致大鼠對開放環(huán)境的新奇度降低，也可能由于拉長整個實驗的觀察時長，導致大鼠因生活節(jié)律影響造成差別。

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