實驗材料

器材：試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋等。 
試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等 
實驗內(nèi)容

1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基​的制備 
（1）計算 根據(jù)配方計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后再分別稱量。 
（2）稱量 準確稱取各種成分。一些不易稱量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸紙上稱量，然后連同硫酸紙一起放入燒杯中。 
（3）溶解 向燒杯內(nèi)加入所需的水量，將牛肉膏用水洗下后，取出硫酸紙棄去。加熱攪拌全溶后稍放冷。 
（4）調(diào)pH值 用酸度計或精密pH試紙測定其pH值，并用10％NaOH調(diào)至所需pH值，必要時用濾紙或脫脂棉過濾。一般比要求的pH高出0.2，因為高壓蒸汽滅菌后，pH常降低。 
（5）分裝 根據(jù)不同需要，可將配好的培養(yǎng)基分裝入配有棉塞的試管或三角瓶內(nèi)（附圖1-1）。注意分裝時避免培養(yǎng)基掛在瓶口或管口上引起雜菌污染。如液體培養(yǎng)基，應(yīng)裝試管高度的1/4左右；固體培養(yǎng)基裝試管高度的1/5左右；裝入三角瓶的量以三角瓶容量的一半為限。 
（6）包扎 試管扎成捆。試管和三角瓶的棉塞外用硫酸紙和牛皮紙包扎，紙上表明培養(yǎng)基的名稱、配制日期等。 
（7）滅菌 培養(yǎng)基用0.1Mpa（15lb/in2）高壓蒸汽滅菌15~20min， 

2.培養(yǎng)基的高壓蒸汽滅菌 

      滅菌原理：水的沸點可隨壓力的增加而提高，當高壓蒸汽滅菌鍋中水煮沸時，因鍋是密閉的，蒸汽不能溢出，而使壓力增加，水的沸點和溫度也隨之增加。因此，高壓蒸汽滅菌是利用高壓蒸汽產(chǎn)生的高溫，以及熱蒸汽的穿透能力來達到滅菌的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的壓力時，溫度可達121℃只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的各種孢子。 
滅菌方法： 
(1) 加水于滅菌器內(nèi)到規(guī)定的水平面。 
(2) 需滅菌的物品（分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養(yǎng)基），棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好（防止鍋內(nèi)水汽把棉塞淋濕），放入滅菌鍋內(nèi)的套筒中。擺放要疏松，不可太擠，否則阻礙蒸汽流通，影響滅菌效果。 
(3) 將滅菌鍋蓋的排氣管插人套筒側(cè)壁的凹槽內(nèi)，關(guān)閉滅菌鍋蓋旋緊螺栓，切勿漏氣。 
(4) 打開放氣閥，加熱，熱蒸汽上升，以排除鍋內(nèi)冷空氣，排氣約5~ l0min，關(guān)閉放氣閥。 
(5) 關(guān)閉放氣閥后，整個滅菌鍋成為密閉狀態(tài)，而蒸汽又不斷增多，這時壓力和溫度都上升，直至壓力表指針達到所需壓力時，開始計時，通過調(diào)節(jié)熱源，維持此壓力到所需時間。 
(6) 滅菌完畢，待壓力自然降至0時，打開放氣閥，注意不能打開過早，否則突然降壓致使培養(yǎng)基沖騰，使棉塞、硅膠泡沫塞沾污，甚至沖出容器以外。 
(7) 打開滅菌鍋蓋，取出已滅菌的器皿及培養(yǎng)基。 
(8) 滅菌鍋用完后，將鍋內(nèi)剩余的水倒掉，以免日久腐蝕。 
3.微生物的分離與純化 
       借助于劃線將混雜的細菌材料逐步稀釋，最后在瓊脂平板上分散開來，使之出現(xiàn)單一菌落而達到分離純化的目的。 

實驗注意事項和原理

注意事項：

1.要嚴格按配方配制。 
2.調(diào)pH不要過頭。 
3. 劃線法分離純化微生物注意各區(qū)勿相互交叉。

4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。 

實驗原理：
      培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素、能源和水。根據(jù)微生物的種類和實驗?zāi)康牟煌�，培養(yǎng)基要選擇合適的配比關(guān)系；選擇合適的理化性質(zhì)；配后要及時滅菌。 
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供細菌生長繁殖之用。 
高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。 
       

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