北五味子木脂素抗焦慮作用及機(jī)制的研究

摘要:目的 研究北五味子木脂素(Schisandra Chinensis BaillLignans,SCL)抗焦慮的作用及機(jī)制. 方法 采用明暗箱試驗(yàn)和高架十字迷宮試驗(yàn),觀察北五味子木脂素低、中、高劑量(35,70,140 mg / kg)灌胃給藥 7 d 后對(duì)小鼠行為的影響;另設(shè)空白對(duì)照組(給予生理鹽水)和地西泮(2 mg / kg)陽性對(duì)照組. 用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA)測(cè)定小鼠血清 γ-氨基丁酸(GABA)的含量. 結(jié)果 明暗箱試驗(yàn)和高架十字迷宮試驗(yàn)結(jié)果顯示:北五味子木脂素中、高劑量組具有顯著的抗焦慮作用(P<0. 05),并呈劑量依賴關(guān)系,這種抗焦慮作用可被氟馬西尼所拮抗. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示:中、高劑量組小鼠血清中 γ-氨基丁酸(GABA)的含量顯著增高. 結(jié)論 北五味子木脂素有顯著的抗焦慮作用,其機(jī)制可能是通過 γ-氨基丁酸受體(γ-aminobutyric acid,GABA-R)而發(fā)揮作用.
關(guān)鍵詞:北五味子木脂素;抗焦慮;明暗箱;高架十字迷宮;γ-氨基丁酸

北五味子( Schisandra chinensis( Turcz) Baill)作為我國傳統(tǒng)的安神藥,其主要藥理活性是木脂素(Schisandra Chinensis Baill Lignans,SCL) 成分. 目前,已從北五味子中分離出了 7 種具有藥理活性的成分,分別為五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、酯乙 . 北五味子木脂素具有多種藥理作用,可清除體內(nèi)自由基、保護(hù)肝臟、提高機(jī)體免疫力及抗腫瘤等. 近年來,有研究發(fā)現(xiàn):北五味子木脂素具有顯著的中樞抑制與安神作用. 根據(jù)我們先前的研究發(fā)現(xiàn):北五味子木脂素具有良好的鎮(zhèn)靜催眠效果,北五味子木脂素對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用較強(qiáng). 本研究擬在其鎮(zhèn)靜催眠作用的基礎(chǔ)上,采用多種焦慮模型觀察北五味子木脂素對(duì)小鼠焦慮的影響,并初步探討其作用機(jī)制,為開發(fā)北五味子輔助抗焦慮的功能食品及藥品提供理論依據(jù),進(jìn)而促進(jìn)北五味子的綜合研究、開發(fā)與利用.

1.實(shí)驗(yàn)材料

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
ICR 小鼠,體質(zhì)量 18 ~ 22 g(長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物許可證號(hào) SCXK(吉) 2011-0004).20 ~ 25 ℃ 分籠飼養(yǎng) 5 d,自由飲食,以使小鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境.

1. 2 藥品與試劑
北五味子木脂素(SCL)(北華大學(xué)林學(xué)院食品科學(xué)與工程研究實(shí)驗(yàn)室);氯化鈉注射液(山東金洋藥業(yè)有限公司);地西泮片劑(0806007,北京益民藥業(yè)有限公司); 氟馬西尼 ( 054k37041, 美國Sigma 公司);小鼠 γ 氨基丁酸(GABA)ELISA 檢測(cè)試劑盒(美國 RD 公司).

1. 3 實(shí)驗(yàn)儀器
小鼠用明暗箱（XR-XB120型，上海欣軟信息科技有限公司提供）;小鼠高架十字迷宮(XR-XG201型,上海欣軟信息科技有限公司提供);酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(美國 Biotek 公司).

2.方 法

2. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥
將 ICR 小鼠隨機(jī)分成 SCL 低、中、高劑量(35,70,140 mg / kg)組,空白對(duì)照組(生理鹽水溶液)和陽性對(duì)照組(地西泮,2 mg / kg),共 5 組,SCL 組每天早、晚灌胃給藥,共 2 次,空白對(duì)照組給予同體積的生理鹽水,陽性對(duì)照組按 2 mg / ( kg·d-1 )給藥,上述各組均連續(xù)給藥(或生理鹽水) 7 d. 第 7 天,SCL 組和空白對(duì)照組給藥 1 h、陽性對(duì)照組給藥0. 5 h 后進(jìn)行測(cè)試. 所有測(cè)試均在 8:00 ~ 14:00 安靜環(huán)境下進(jìn)行.

2. 2 小鼠明暗箱試驗(yàn)
進(jìn)行明暗箱實(shí)驗(yàn)前,為減少一些外界的非必要刺激對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,每天對(duì)小鼠進(jìn)行撫摸,時(shí)間為 1 ~ 2 min,連續(xù) 5 ~ 7 d 后開始測(cè)試. 將實(shí)驗(yàn)小鼠面向暗箱放置到明箱中央,然后記錄下 5 min 內(nèi)小鼠在明箱活動(dòng)的時(shí)間和小鼠在明箱和暗箱之間的穿梭次數(shù).

2. 3 小鼠高架十字迷宮試驗(yàn)
在進(jìn)行高架十字迷宮測(cè)試之前,為保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性,首先讓小鼠在單獨(dú)籠中自由活動(dòng) 5 min,然后再進(jìn)行測(cè)試. 把待測(cè)小鼠放入迷宮的中央,面向開臂,然后開始記錄. 主要記錄數(shù)據(jù)包括 5 min 內(nèi)小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和在開臂停留的時(shí)間,進(jìn)入閉臂的次數(shù)和在閉臂停留的時(shí)間. 在整個(gè)測(cè)試過程中,在兩臂內(nèi)均以小鼠任意一足退出代表完成一次活動(dòng). 為了保證試驗(yàn)準(zhǔn)確性,在每次完成后均要進(jìn)行迷宮清理,然后才能進(jìn)行下一次測(cè)試. 將記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,主要考察指標(biāo)包括:進(jìn)入開臂次數(shù)與進(jìn)入兩臂總次數(shù)的百分比( OE);在開臂內(nèi)的活動(dòng)時(shí)間與進(jìn)入兩臂的總活動(dòng)時(shí)間的百分比(OT).

2. 4 氟馬西尼腹腔注射
測(cè)試前半小時(shí),給予 SCL 低、中、高劑量組和地西泮陽性對(duì)照組動(dòng)物腹腔注射 1 次氟馬西尼(3 mg / kg).

2. 5 血清 γ 氨基丁酸濃度的測(cè)定行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,立即將小鼠斷頭取血,4 ℃,3 000 r / min 離心取上清液,用小鼠 γ 氨基丁酸 ELISA 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清 γ氨基丁酸含量,用酶標(biāo)儀測(cè)定 450 nm 波長的吸光度(OD)值,最終γ 氨基丁酸含量用 μg / mL 表示.

2. 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用 SPSS 13. 0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用單因素方差分析( One-way ANOVA)進(jìn)行多組間比較差異檢驗(yàn),所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x ■ ±s)表示,P<0. 05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

4 討 論
基于焦慮癥可由多種因素誘發(fā),例如心理因素、社會(huì)壓力、精神刺激等因素,本研究采用常見的焦慮模型明暗箱和高架十字迷宮能很好地考察 SCL的抗焦慮作用. 在本研究中的明暗箱測(cè)試結(jié)果表明:北五味子木脂素劑量為 70,140 mg / kg 時(shí),具有明顯的抗焦慮作用,并且其抗焦慮作用隨著 SCL劑量的增加而增強(qiáng). 在高架十字迷宮試驗(yàn)測(cè)試中,通常用小鼠 OT 和 OE 來反映小鼠的焦慮狀態(tài). 本研究的高架十字迷宮試驗(yàn)中,北五味子木脂素劑量達(dá)到70 mg / kg 時(shí),OT 和 OE 分別﹥ 26% 和 28% ,與空白對(duì)照組的 19%和 23%相比均明顯增加. 本實(shí)驗(yàn)中采用苯二氮卓位類藥地西泮作為陽性對(duì)照,初步探討了 SCL 抗焦慮機(jī)制,地西泮抗焦慮機(jī)制是通過增加γ-氨基丁酸(GABA)受體的含量,使其突觸后抑制效應(yīng)增強(qiáng),從而達(dá)到抗焦慮的作用. 近年來研究發(fā)現(xiàn):在 γ-氨基丁酸神經(jīng)通路中發(fā)揮重要作用的是 γ-氨基丁酸 A 型受體(GABA-A 受體). GABA 是腦內(nèi)主要的神經(jīng)遞質(zhì),就是通過抑制 GABA-A 受體發(fā)揮作用,相反,氟馬西尼則是該受體的拮抗劑,可以通過阻斷苯二氮卓類藥物(如地西泮等)與該受體的結(jié)合,使抗焦慮藥物的作用減弱,甚至逆轉(zhuǎn).本研究中明暗箱試驗(yàn)和高架十字迷宮試驗(yàn)的結(jié)果均顯示:北五味子木脂素和地西泮的抗焦慮作用可以被氟馬西尼所抑制,因此,SCL 發(fā)揮抗焦慮作用的機(jī)制有可能是通過 γ-氨基丁酸受體實(shí)現(xiàn)的. 除 γ-氨基丁酸類神經(jīng)遞質(zhì)之外,多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)和 5-羥色胺(5-HT)等神經(jīng)遞質(zhì)均與焦慮癥相關(guān),因此,有關(guān)北五味子木脂素抗焦慮的確切作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究.