MTT（噻唑藍）原理、用途、實驗步驟介紹
MTT
什么是MTT，什么是MTT法
MTT，商品名稱噻唑藍
全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學名為 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，一種黃顏色的染料，由于應(yīng)用于細胞存活率的檢測而被熟知。在細胞培養(yǎng)中，MTT不僅僅是一個化學物品，更是一種實驗方法。
MTT原理
MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
MTT用途
MTT主要有兩個用途
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細胞毒性的測定;
2.細胞增殖及細胞活性測定。 檢測原理如上所述，根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細胞數(shù)量，OD值越大，細胞活性越強(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。
MTT實驗步驟
普通MTT法實驗步驟：
1：接種細胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2 : 培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間)。
3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h
終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。
4：比色：選擇490nm波長，在酶標儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
MTT檢測方法
MTT實驗結(jié)果常用酶標儀讀取，通過比較不同孔間OD值大小來判斷細胞生長狀況，以此作為比較藥物毒性大小或者細胞活性的重要依據(jù)。
