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QuickAntibody免疫佐劑使用中已經遇到的問題以及答復

瀏覽次數(shù):4466 發(fā)布日期:2012-9-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

使用中已經出現(xiàn)的問題:

 

1、有客戶沒有仔細閱讀說明書,使用QuickAntibody佐劑時按照弗式佐劑方法與抗原進行乳化等操作,并在4度冰箱放置過夜,第二日取出直接免疫,結果造成效價不理想。

答復:QuickAntibody佐劑無需乳化,而且無論是佐劑本身還是與抗原混合后,長時間靜置均易產生沉淀,因此均需要搖勻后才能配制和注射。

 

2、有客戶沒有仔細閱讀說明書,使用QuickAntibody佐劑之前發(fā)現(xiàn)佐劑里面有沉淀成分,以為是污染物,離心去除,導致實驗結果效價不理想。

答復:QuickAntibody佐劑產生沉淀為正,F(xiàn)象,只需在用前搖勻即可,若離心去除,必然影響免疫效果。

 

3、有客戶使用QuickAntibody佐劑免疫小鼠后腿小腿肚肌肉時,誤把踝關節(jié)當成膝關節(jié),從而使免疫部位太過偏下,免疫100ul的佐劑與抗原混合液時,大量液體流出。

答復:小鼠后腿大腿一般被腹部皮膚包裹,我們正常見到的后腿肌肉部分為小腿肌肉。另外若免疫至踝關節(jié),由于免疫部位距離發(fā)生有效免疫應答部位較遠,抗原在擴散至淋巴結前容易被降解,導致免疫應答效率降低。

 

4、有客戶使用QuickAntibody佐劑免疫小鼠,因動物較多,免疫時間較長,最后佐劑在針管中沉淀在管壁,導致前面免疫的小鼠抗體效價較高,后面免疫的小鼠抗體效價較低。

答復:QuickAntibody佐劑易產生沉淀,建議在熟練使用之前,每次抽取較少量佐劑與抗原混合物進行免疫(以二、三只小鼠用量為佳);在操作熟練后,可以適當增加免疫動物的數(shù)量(如每抽取一次免疫五只以上小鼠)。

 

5、有客戶使用QuickAntibody佐劑制備單抗,抗原為多肽偶聯(lián)載體蛋白,免疫兩針后針對多肽的ELISA滴度僅為1:200,但是成功融合出4株雜交瘤細胞株,其中兩株產生的單抗可以做免疫組化,完全達到他們的預期結果!

答復:我們說明書中所說的效價為蛋白抗原免疫后的效價,對于多肽和小分子來說,免疫后不可能達到如此高的滴度!原因是多肽和小分子為半抗原,本身只有一個表位或不足一個表位,而蛋白抗原有成百上千個表位。建議客戶檢測針對載體蛋白的ELISA滴度,如果達到說明書滴度范圍,而且檢測到一定水平的多肽或小分子滴度,則表明免疫成功,完全可以繼續(xù)后續(xù)的融合工作。此時多肽或小分子滴度高低取決于該表位的免疫原性和偶聯(lián)效率,基本與佐劑無關!然而,與蛋白抗原相比,多肽或小分子單抗的陽性克隆率則要低得多,因此客戶需要篩選更多的克隆。

來源:北京康碧泉生物科技有限公司
聯(lián)系電話:010-65420277
E-mail:kbqbio@163.com

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