ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。在此，我們將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)如下：

 

操作	注意問題	解決方案
加樣	1、血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣   2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵育箱前等待時(shí)間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）   3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外	1、標(biāo)本為血清，最好將血液先自然存放1-2h后，再用3000rmp離心15分鐘，標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20℃的低溫冰箱中 2、加樣后及時(shí)放入孵箱 3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)版表面輕拭吸干 4、如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑 5、酶標(biāo)本較多，請(qǐng)分批操作
孵育	1、孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于徹底清洗 2、孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底	1、貼封片或加蓋 2、按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間
洗板	1、采用手工洗板，孔與孔之見液體交叉 2、采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差 3、反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長	1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干   2、合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)
顯色	1、顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑 2、加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流	1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用 2、加樣時(shí)保持顯色劑不外流 3、A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械
終止	加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加	加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡
讀板	讀板時(shí)板底不清潔	應(yīng)保持酶標(biāo)板清潔
全過程	1、整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸 2、實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量

 

實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)治理�，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。