質粒DNA作為分子克隆和基因表達的載體，在分子生物學領域已經(jīng)得到了非常廣泛的應用。隨著基因治療研究的不斷發(fā)展，DNA疫苗應運而生，人們對質粒DNA又有了新的要求和需要。用于基因治療的質粒DNA，是將治療基因至于含有真核表達元件的質粒載體中，而構建成的重組質粒。目前，應用質粒DNA進行的基因治療幾乎涵蓋了所有的疾病種類，主要有遺傳性疾病，如囊腫性纖維化（CF），腫瘤的基因治療，基因疫苗，如乙肝DNA疫苗、HIV DNA疫苗等。作為藥物使用的質粒DNA，使用量大，通常個人劑量達到毫克量級，一般都采用發(fā)酵的方法制備；又因其應用于臨床，質粒DNA的純度、內(nèi)毒素等指標的要求更加嚴格。因此，對于實驗室和臨床應用來說，獲得高純度、低內(nèi)毒素的質粒DNA都是十分有意義的。

²        與我們討論實驗的方案，提出你對純度的要求，簽定委托合同。

²        您可以提供含有目的質粒菌株，或構建好的質粒（我們?yōu)槟�轉化到合適的大腸桿菌中），也可以提供發(fā)酵后收集的菌體。

²        提供必要的資料，包括酶切位點，質粒大小，以供鑒定時使用。

 

²        對受體菌進行發(fā)酵工藝的研究，一般情況下發(fā)酵的產(chǎn)量約為10毫克質粒DNA/升，通過發(fā)酵條件的優(yōu)化可以達到產(chǎn)量為30-60毫克質粒DNA/升。如果用合成培養(yǎng)基，產(chǎn)量可以達到60-150毫克質粒DNA/升，但是生產(chǎn)的成本很高。

²        對質粒DNA進行純化工藝的研究，我們有比較豐富的質粒DNA純化的經(jīng)驗，可以根據(jù)您的具體要求設計純化方案。為您提供可以放大的純化工藝。

²        如果您僅需要獲得毫克級的純品質粒DNA（純度大于90%），而對發(fā)酵工藝和純化工藝不作要求。我們可以為您提供質粒DNA的制備服務。

 

²        帶有缺刻的質粒DNA從cccDNA中完全去除比較困難，一般情況下缺刻的質粒DNA在純品含有大約5%左右。(每毫克質粒DNA中殘余蛋白小于1ug，genomic DNA 小于2 ug，RNA小于0.1 ug，內(nèi)毒素小于10 E.U.)

²        菌體中質粒DNA的定量，我們采用質量穩(wěn)定的質粒DNA抽提試劑盒抽提質粒DNA，在瓊脂糖凝膠電泳沒有RNA污染，用紫外分光光度法定量。這樣的定量方法并不能反映菌體中質粒DNA含量，但是對于我們的發(fā)酵工藝來說具有指導意義。

 

bio-equip.com