需要您協(xié)助的

² 與我們討論實驗的方案，提供必要的資料，簽定委托合同。

² 您可以提供已克隆在原核表達(dá)/克隆載體上的質(zhì)�；蚓�株。

² 也可將已經(jīng)通過測序驗證的目的PCR產(chǎn)物或模板交給我們，由我們?yōu)槟�克隆在相�?yīng)的載體上。

² 目的基因也可以存在于細(xì)菌或病毒中，可以通過RT-PCR的方法獲得目的基因，費(fèi)用另計。

² 目的基因也可以存在于細(xì)菌或病毒中，可以通過RT-PCR的方法獲得目的基因，費(fèi)用另計。

² 如果有經(jīng)過驗證的抗體可用于Western驗證表達(dá)的蛋白，請?zhí)峁��?br>


我們提供的服務(wù)

² 目的基因的克�。何覀冇卸喾N原核表達(dá)載體（如：pET System、QIAexpress System）供您選擇，完全能滿足不同的實驗要求。我們會提供克隆好的質(zhì)粒、菌株及測序報告。

² 蛋白質(zhì)的原核表達(dá)及純化：我們將這一過程分為前期發(fā)酵條件的初步實驗，純化工藝的確定，后期的蛋白質(zhì)的大量制備以及蛋白質(zhì)鑒定三個部分，時間為1～3個月，最終我們提供給您：初步的發(fā)酵條件；比較合理的、可以放大的純化工藝；純化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白電泳結(jié)果和詳細(xì)的實驗記錄；

² 交付的蛋白將通過Western檢驗以確定表達(dá)的蛋白的正確性，Western所用的抗體由客戶提供。

可能遇到的問題及解決策略

² 沒有目的蛋白表達(dá)；目的基因并非在所有的原核表達(dá)載體中都能順利表達(dá)，由于結(jié)構(gòu)或其他原因造成無表達(dá)或表達(dá)量過低，可通過更換表達(dá)載體的方式解決，這種解決方法遠(yuǎn)比優(yōu)化表達(dá)條件來的迅速有效。

² 不可溶性蛋白質(zhì)的純化：在蛋白質(zhì)純化過程中，在研究發(fā)酵條件時我們盡可能使目的蛋白以活性形式存在于大腸桿菌的胞質(zhì)中，菌體經(jīng)破碎后，純化有活性目的蛋白質(zhì)。對于以包涵體存在的大量目的蛋白，首先對包涵體洗滌，然后用尿素或鹽酸胍溶解進(jìn)行純化，再重新折疊，以獲取活性蛋白。

² Western檢測沒有信號：可能的原因是克隆時目的基因的閱讀框產(chǎn)生變化，或客戶提供的抗體不合適。



特別說明

² 由客戶提供的表達(dá)克隆但無法表達(dá)，確定是克隆問題的，我們將收取部分費(fèi)用。

² 我們提供給客戶的除表達(dá)的蛋白外，還包括克隆菌種，以供客戶使用，或由我們保存，將來按客戶需要再進(jìn)行表達(dá)提取，費(fèi)用另計。

² 由于目前我們所用的表達(dá)系統(tǒng)對于1kb以內(nèi)的基因有較高的保證，所有常規(guī)業(yè)務(wù)限于1kb的基因，大于1kb的基因價格另議。

² 對于所表達(dá)的蛋白，本公司僅僅按照所提供的序列來設(shè)計實驗，對于該序列是否一定具有所期望的生物活性，我們不承擔(dān)任何責(zé)任。