酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是最常用的標記免疫分析技術之一。
它基于一種酶標記抗體,能夠檢測固定在96孔或384孔酶標板上的抗原,加入的底物可以產(chǎn)生與原始樣品中存在的抗原量相關的顏色變化或光信號。這是一種簡單而快速的技術,用于檢測附著在固體表面的抗體或抗原。作為最敏感的免疫分析方法之一,ELISA在實驗室研究、疾病生物標志物診斷和各個行業(yè)的質(zhì)量控制方面具有商業(yè)價值。
ELISA的主要類型
根據(jù)抗原固定策略、抗體標記策略以及抗體-抗原反應類型(直接識別或競爭)的不同,ELISA可以分為:
直接法、間接法、夾心法、競爭法。

直接法ELISA是最簡單的ELISA形式�?乖ㄟ^一段時間的孵化被動地附著在酶標板孔底部。在簡單的洗滌步驟后,通過添加與酶共價連接的抗體來檢測抗原。孵化和洗滌后,通過添加色原/底物產(chǎn)生顏色變化。在一段時間后,或在規(guī)定時間通過化學方法停止酶活性后,在分光光度計中讀取顯色。
由于只涉及一個抗體,所以直接法ELISA適用于樣品中抗原的定性或定量檢測、抗體篩選和表位基因圖譜。這種方法沒有交叉反應的二抗,可以在更短的時間內(nèi)進行檢測。然而,一抗的免疫反應可能會受到酶標記的不利影響。標記的一抗不常用,因此使用直接法ELISA時,需要為每個特定的ELISA系統(tǒng)標記一抗。

間接法ELISA檢測是在直接法ELISA的基礎上添加一個標記二抗進行檢測,是目前最|流|行的ELISA形式�?乖ㄟ^孵化被動地附著在孔上。洗滌后,抗原與抗原特異性抗體一起孵化。洗滌后,添加與酶共價連接的抗體,此抗體對第一次添加的抗體所產(chǎn)生的物種具有特異性,可以檢測所有結(jié)合的抗體。孵化和洗滌后,可以進行測試和讀數(shù)。
與直接法ELISA類似,間接法ELISA可用于抗體篩選、表位基因圖譜和蛋白質(zhì)定量檢測。二抗的作用是增強一抗的信號,使間接ELISA比直接ELISA更敏感。然而,它也會產(chǎn)生更高的背景信號,并可能降低整體信號。

夾心法ELISA是最有用的免疫測定形式之一,它設計用于檢測可溶性抗原。根據(jù)使用的抗體數(shù)量,該ELISA有兩種形式。兩者的原理是相同的,一種是直接將抗原固定在固相上,另一種是將捕獲抗體固定在固相上以捕獲抗原。
▪ 直接夾心法ELISA(圖3a)中,捕獲抗體被附著在固相上。洗去多余的未結(jié)合抗體后,加入的抗原被特異性捕獲。然后用第二種酶標記的抗體直接針對該抗原進行檢測。這種類型的檢測適用于有單一物種抗血清可用,且抗原不能很好地附著在板上時。
▪ 間接夾心法ELISA(圖3b)中,通過第二種未標記的抗體來檢測抗原。該抗體則使用酶標記的偶聯(lián)物來檢測。重要的是偶聯(lián)物不能與捕獲抗體結(jié)合,因此產(chǎn)生捕獲抗體的物質(zhì)必須是不同的。該方法的優(yōu)點是,可以使用單一的抗偶聯(lián)物來檢測任意數(shù)量樣品中抗體的結(jié)合。
這種方法適用于抗原被其他蛋白質(zhì)污染或低濃度時。在這些情況下,抗原不能以足夠高的濃度直接附著在固相上,以使用直接或間接ELISA進行檢測。夾心ELISA依賴于具有至少兩個抗原位點的抗原,以便至少兩個抗體群可以與之結(jié)合。

直接法ELISA是最簡單的ELISA形式�?乖ㄟ^一段時間的孵化被動地附著在酶標板孔底部。在簡單的洗滌步驟后,通過添加與酶共價連接的抗體來檢測抗原。孵化和洗滌后,通過添加色原/底物產(chǎn)生顏色變化。在一段時間后,或在規(guī)定時間通過化學方法停止酶活性后,在分光光度計中讀取顯色。
上述系統(tǒng)是ELISA的基本配置。所有這些都可以適用于使用競爭或抑制條件測量抗原或抗體,如圖4所述。隨著溶液中游離抗原(抗體)量的增加,將與固定基質(zhì)結(jié)合的抗體(抗原)量會減少。在洗滌步驟之后,添加發(fā)色團底物以產(chǎn)生信號(顏色變化或光)�?贵w/抗原挑戰(zhàn)引起的信號變化揭示了競爭性抗原/抗體的信息。樣品中的抗原越多,最終孔底結(jié)合的參照抗原的抗體就越少,信號就越弱。
將可能含有抗原的未知樣品與含有已知量純化抗原的類似樣品進行比較時,競爭法ELISA適用于測量復雜混合物中的抗原濃度。

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國內(nèi)領先的生命科學領域耗材制造商
無錫耐思生命科技股份有限公司(以下簡稱“耐思”)于 2009 年成立,并創(chuàng)立 NEST 品牌,秉持“做高端耗材,創(chuàng)國際知名品牌”的信念,專注于生命科學領域產(chǎn)品的研發(fā)與制造。耐思擁有 7500m2 十萬級潔凈車間,2500m2 萬級潔凈車間,成熟的生產(chǎn)工藝、先進的機器設備、專業(yè)的研發(fā)中心、資深的管理團隊,是國內(nèi)領先的醫(yī)療器械和生命科學領域耗材制造商。
2020 年,公司正式更名為無錫耐思生命科技股份有限公司。
美國分公司成立
隨著業(yè)務的發(fā)展,NEST 產(chǎn)品已遠銷北美、歐洲、日本、韓國、印度等全球多個國家,為了與海外客戶建立深厚的合作關系,并更快地將產(chǎn)品送到海外客戶手中, 我們于2003年在美國新澤西州成了了NEST美國分公司。NEST美國是屬于無錫耐思生命科技股份有限公司的分支機構,擁有一支具有豐富經(jīng)驗和銷售技巧的專業(yè)團隊,能與客戶進行深入的溝通,更好更快地了解客戶需求,并給予專業(yè)的技術支持。2022年,NEST美國將在亞利桑那州鳳凰城開設一個新的48,000英尺的倉庫,隨著新倉庫的落成,將為客戶極大的降低了存儲與物流成本。
引進先進設備,確保品質(zhì)穩(wěn)定
耐思為確保質(zhì)量的穩(wěn)定,實現(xiàn)“原料采購 - 生產(chǎn) - 包裝 - 滅菌 - 交付”的無縫對接, 2012年投資1.5億新建了2.7萬平米廠房(無塵潔凈車間),且引進國際先進電子輻照設備RhodotronTT200(輻照滅菌流程經(jīng) ISO13485、ISO11137 質(zhì)量體系認證),進口符合USP CLASS 6的醫(yī)用級原材料,按GMP質(zhì)量管理規(guī)范標準化生產(chǎn),現(xiàn)已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 認證及醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證。
2021年NEST新增4500m2十萬級潔凈車間和1500m2萬級潔凈車間,用于醫(yī)療器械與醫(yī)藥包裝耗材的生產(chǎn)。
三大類產(chǎn)品——實驗室耗材、醫(yī)療器械、醫(yī)藥包裝耗材
耐思的產(chǎn)品分為三大類:實驗室耗材(細胞學類耗材、微生物檢測類耗材、分子生物學類耗材、通用耗材類)、醫(yī)療器械和醫(yī)藥包裝耗材。產(chǎn)品適用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、輕化工、食品、環(huán)保、生物能源、海洋生物資源、再生醫(yī)學等生命科學領域,品項多、規(guī)格全,滿足了客戶不同的需求。相比進口耗材,NEST 貨期短、品質(zhì)優(yōu)、價格低,可大大提高工作效率并降低使用成本。
定制服務
無錫耐思生命科技股份有限公司擁有強大的模具設計能力及機床精密加工及塑料成型能力,除常規(guī)品的銷售,同時向行業(yè)提供各種定制服務。
發(fā)展歷程
2009年,成立:創(chuàng)立NEST品牌,從細胞培養(yǎng)類產(chǎn)品開始研發(fā)
2010年,市場開拓:參加德國慕尼黑,美國PITTCON,正式開始進軍海外市場
2011年,通過ISO 9001認證
2012年,籌建新工廠
2013年,美國耐思成立:新增分子生物學耗材,開始研發(fā)細胞工廠
2014年,新車間投入生產(chǎn),滅菌中心通過ISO 11137認證:投資1.5億新建2.7萬平米廠方,引進比利時RhodotronTT200電子束輻照設備滅菌中心通過ISO11137認證
2015年,滅菌中心正式投入使用
2016年,通過ISO 13485認證:細胞工廠驗證完成,正式投放市場
2017年,完善工業(yè)類客戶產(chǎn)品線:細胞工廠系列、搖瓶系列等產(chǎn)品上市
2018年,優(yōu)化管理,升級設備,研發(fā)醫(yī)療器械類產(chǎn)品,為獲取醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證而做準備
2019年,取得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證,銷量破億
2020年,無錫耐思生命科技股份有限公司成立,開發(fā)新冠防疫物資
2021年,在美國新澤西州新增3300m2倉庫和研發(fā)基地
2022年,在美國亞利桑那州新增4500m2的倉庫,極大的降低了存儲與物流成本
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