明膠酶譜【原理分析】

整體課題實(shí)驗(yàn)外包--酶譜法的基本過(guò)程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離

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明膠酶譜

酶譜法的基本過(guò)程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價(jià)金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,最后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色,再脫色,在藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶,條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

復(fù)性原理:在電泳過(guò)程中,SDS與樣品中的MMPs結(jié)合(當(dāng)然是可逆性結(jié)合),破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用,而只有當(dāng)將膠置Trition中洗脫(最好是放在搖床上搖,30min/次,做2次或15min/次,4次。靜置于Trition中是不妥的。)時(shí),由于SDS被Trition結(jié)合而去除,從而使MMPs恢復(fù)了活性。

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