外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-100nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為"exosome"。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、"運載物"和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

云序生物是外泌體研究的先驅(qū)者，我們提供多種外泌體測序服務包括：全轉(zhuǎn)錄組測序、circRNA測序、miRNA測序、lncRNA測序、mRNA測序。外泌體的測序研究比其它的測序研究難度高，因為外泌體測序研究在前期需要提取外泌體，并對外泌體鑒定。針對外泌體的提取難度大等問題。我們云序生物為客戶提供了一種快速、高效的服務方案—外泌體一站式服務。那么我們云序生物一站式服務的內(nèi)容和優(yōu)勢包括：

云序生物一站式服務內(nèi)容:

云序生物一站式服務優(yōu)勢:

1.外泌體一站式服務：客戶只需提供細胞上清、血清、血漿、外泌體RNA，云序生物將為您提供樣品準備，文庫制備，上機測序到數(shù)據(jù)分析的整套服務。

2．商業(yè)化試劑盒抽提外泌體：云序生物使用成熟的商業(yè)化試劑盒（Qiagen）抽提外泌體，極大改善樣品的均一性�？蛻艨蛇x擇從外泌體到RNA測序一步流程法，也可選擇先提取外泌體，在由外泌體抽取RNA兩步流程法。

3.全面的檢測所有類型的RNA：云序生物擁有市面上最全的，針對不同物種的去rRNA試劑盒，能夠全面保留所有類型的RNA信息。

4.鏈特異性檢測：云序生物采用鏈特異性建庫方案，可以準確檢測反義RNA，提供更全面的轉(zhuǎn)錄組信息。

5.專業(yè)化的生物信息分析：強大的生物信息學團隊，滿足客戶的各類深入數(shù)據(jù)分析需求。

我們云序生物對外泌體研究的優(yōu)勢眾多，今天主要展示我們云序生物的外泌體測序一站式服務中的外泌體鑒定技術：

云序生物—外泌體鑒定

依托高通量測序揭示外泌體攜帶RNA分子對細胞功能造成影響，推動了外泌體在疾病領域的研究進程。當前對外泌體的分離方法有很多種，例如超速離心，凝膠排阻層析，免疫沉淀，微流控芯片等，無論什么分離方法都需要對外泌體進行鑒定。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年的發(fā)表一些指南，在指南中給定了這三個實驗聯(lián)合鑒定外泌體（或者說細胞外囊泡）的方法。三個實驗是相互佐證的，其中的邏輯是這樣的：使用電鏡來觀察你的樣品中是否有與外泌體相似的經(jīng)典結構，有經(jīng)典結構說明你的樣品中有外泌體或者與外泌體類似的如溶酶體、蛋白聚團、支原體等結構；WB檢測發(fā)現(xiàn)樣品中具有外泌體的標志物，那就一定程度上排除了溶酶體、蛋白聚團、支原體等情況，但依舊不知道你樣品中整體情況，電鏡和WB的連用只能證明你的樣品中有外泌體，但是有多少、多不多這個整體情況沒辦法把握；所以就引入了NTA實驗，NTA是為了反映你的外泌體樣品中粒子的群體特征，它是跟電鏡和WB相輔相成的。接下來詳細介紹外泌鑒定的幾大方法：

云序生物—外泌體鑒定三大方法

云序生物—透射電鏡形態(tài)鑒定

我們知道雙層囊膜結構是外泌體重要標志之一，由于這種雙層囊膜結構是亞顯微結構。普通光學顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結構。但透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope, TEM)分辨率可達0.1 ~ 0.2 nm，可將被觀察物體放大至數(shù)百萬倍，非常適合進行外泌體雙層囊膜超微結構觀測。從而使TEM檢測在外泌體研究中得到很好利用。云序生物技術團隊長期從事外泌體研究，積累了豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經(jīng)驗，為外泌體研究者提供了高質(zhì)量外泌體TEM檢測服務。 

云序生物— Western Blot鑒定

Western Blot是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標蛋白與特有性一抗結合，再與辣根過氧化物酶（HRP）標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標蛋白在樣本中的表達情況。該法結合了凝膠電泳和固相免疫測定兩種技術的高特異性和高敏感性，可以對目標蛋白進行定型和半定量的分析。外泌體Western blot鑒定時通常會檢測哪些指標蛋白？根據(jù)外泌體相關文獻的統(tǒng)計，排在前4位的檢測指標為CD63（13/22）、TSG101(8/22)、CD9和CD81并列第三位（6/22）接著檢測較多的4個指標為Alix（4/22）、HSP70(3/22)、flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)；我們云序生物對外泌體的鑒定時，主要是選擇外泌體表面CD63、CD9、TSG101標記，進行western blot鑒定。通過western blot鑒定一定程度上排除了TEM檢測無法排除的溶酶體、蛋白聚團、支原體等。

云序生物—Nanosight粒徑密度分布分析

透射電鏡觀察能夠確認外泌體的形態(tài)學特征，WB檢測能一定程度上排除了溶酶體、蛋白聚團、支原體等情況，但依舊不知道樣品中整體情況，無法體現(xiàn)樣本中所有外泌體顆粒的粒徑分布情況及整體濃度；流式細胞儀可測定的粒徑大小為150nm以上，并不適合檢測游離的外泌體顆粒。云序生物采用基于馬爾文Nanosight平臺的納米顆粒追蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)技術，這種技術是一種新穎的納米顆粒表征方法，它通過光學顯微鏡得到每個納米顆粒的散射光圖形，并對每個顆粒的布朗運動進行追蹤和分析，從而計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NTA技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一，該技術能夠快速、精準地分析外泌體粒徑分布濃度，為外泌體存在提供有力證據(jù)。

云序生物—外泌體研究流程

對外泌體的研究主要分為3個版塊：外泌體提取與純化、外泌體鑒定及RNA質(zhì)檢、外泌體RNA測序及分析。通過把外泌體鑒定放在了外泌體研究流程的中間的核心位來突出外泌體鑒定的重要性。

云序相關產(chǎn)品推薦：  

外泌體—全轉(zhuǎn)錄組測序

外泌體—環(huán)狀RNA測序

外泌體—lncRNA測序

外泌體—MiRNA測序

外泌體—mRNA測序

往期回顧

外泌體轉(zhuǎn)錄組學的那些事—云序生物！

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