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Gene Ontology(GO)分析
GO功能分類和GO功能富集.
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最后更新:2017-9-25半年訪問:117
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基因本體論(Gene Ontology, GO)[1]是一個(gè)被廣泛使用的生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù),它由兩個(gè)方面組成:其一為本體自身,即由生物學(xué)家定義好的詞條以及它們之間的結(jié)構(gòu)化關(guān)系;其二為基因產(chǎn)物和詞條之間的關(guān)系,即基因本體注釋。本體是某一專門領(lǐng)域的有嚴(yán)格約束的功能詞匯或稱作功能類,它們通過有向無環(huán)圖(Directed Acyclic Graph, DAG)的形式將嚴(yán)格定義的不同功能類之間的關(guān)系組織起來。GO是跨越原核生物與真核生物各物種的基因功能分類體系,分為三個(gè)獨(dú)立的ontology, 分別是生物過程(biological process, BP),分子功能(molecular function, MF),和細(xì)胞組分(cellular component, CC)。GO分析是對(duì)這三個(gè)ontology分別進(jìn)行分析。更多的內(nèi)容可以參考gene ontology官網(wǎng)http://www.geneontology.org。這方面進(jìn)一步的學(xué)習(xí)可以參加由上海生咨生物(www.biorefer.com)組織的研習(xí)班, 示例視頻http://www.biorefer.com/biorefer/flv/playflv.php?id=14。

我們對(duì)GO分析對(duì)于有功能注釋的物種和對(duì)功能注釋缺少的物種采用二種不同的方法進(jìn)行分析。有功能注釋的物種,如人類、大鼠、小鼠通常我們采用DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)[2]進(jìn)行分析。DAVID是一個(gè)生物信息數(shù)據(jù)庫(kù),整合了生物學(xué)數(shù)據(jù)和分析工具,為大規(guī)模的基因或蛋白列表(成百上千個(gè)基因ID或者蛋白ID列表)提供系統(tǒng)綜合的生物功能注釋信息。DAVID的使用非常廣,有超過2.6篇的引用。提交分析列表獲得結(jié)果之后,采用內(nèi)部的用Perl和R開發(fā)的DAVIDPipeline軟件進(jìn)行繪圖。對(duì)于沒有功能注釋的物種,如果有蛋白質(zhì)序列優(yōu)先選用蛋白質(zhì)序列,采用BLAST+軟件(version: 2.2.30+)與GO序列數(shù)據(jù)庫(kù)(****年**月**日更新)進(jìn)行比對(duì),選擇E-value<1e-8且相似度大于30%的序列的匹配最好的序列的注釋做為GO注釋,同時(shí)采用Interproscan軟件(version: 5.25-64.0 )進(jìn)行GO功能注釋預(yù)測(cè)。將兩種方法得到的GO注釋合并后,采用[****年**月**日]更新的GO數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)GO功能進(jìn)行分類分析。對(duì)于選取差異表達(dá)基因或者差異表達(dá)蛋白,以[****]為背景參照,然后采用Fisher’s exact test方法,檢驗(yàn)該功能模塊中是否非隨機(jī)地富集了差異基因。

GO分析結(jié)果主要包括GO功能分類結(jié)果和GO功能富集結(jié)果。

GO功能分類分析

GO功能分類是在某一功能層次上統(tǒng)計(jì)蛋白或者基因的數(shù)目或組成,往往是在GO的第二層次。此外也有研究都挑選一些Term,而后統(tǒng)計(jì)直接對(duì)應(yīng)到該Term的基因或蛋白數(shù)。目的是展示數(shù)據(jù)集大概的GO功能情況,我們提供幾種不同風(fēng)格的圖形以供選擇。

圖1.參考圖注,GO categories assigned to all proteins. Y-axis represents the count of proteins. The proteins were categorized according to the annotation of GO, and the number of each category is displayed based on biological process, cellular components, and molecular functions.
圖2.風(fēng)格2,3,4
圖3.風(fēng)格5

GO功能富集分析

GO功能富集目的是為了獲得相對(duì)于本底參照顯著富集的功能類別,通過該項(xiàng)分析可以找出在統(tǒng)計(jì)上顯著富集的.該功能或者定位有可能與研究的目前有關(guān)。我們也提供了幾種不同的風(fēng)格的圖形以供選擇。

 

圖4. Top 10 enrichment GO categories. X-axis represents –log10 p-value. The count of proteins corresponds to circular size.
 
圖5. 示例圖2,分別的條狀圖顯示Top 10 enrichment GO categories.
圖5. 示例圖3,氣泡圖Top 20 enrichment GO categories.

其它結(jié)果

篩選出的細(xì)胞定位

 
 
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分析軟件參考, Biorefer-DAVIDPipeline , Biorefer-GOPipeline
  1. Ashburner, M. , et al., Gene ontology: tool for the unification of biology. The Gene Ontology Consortium. Nat Genet, 2000. 25(1):p. 25-9.
  2. Huang da W, Sherman BT, Lempicki RA (2009) Systematic and integrative analysis of large gene lists using DAVID bioinformatics resources. Nat Protoc 4:44–57.

 

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