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活細(xì)胞成像監(jiān)控NK細(xì)胞：突破傳統(tǒng)檢測(cè)，讓細(xì)胞監(jiān)測(cè)變成“直播”

瀏覽次數(shù)：317　發(fā)布日期：2025-2-26　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

前言：
自然殺傷（NK）細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其無需事先敏化即可識(shí)別并消滅惡性或病毒感染細(xì)胞。在前臨床研究中，NK細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估NK細(xì)胞療法的效果。這些實(shí)驗(yàn)通過將NK細(xì)胞與熒光標(biāo)記的靶細(xì)胞共培養(yǎng)，測(cè)量靶細(xì)胞裂解程度以評(píng)估NK細(xì)胞活性。然而，傳統(tǒng)染料如Calcein-AM的快速泄漏影響了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。本研究采用綠色熒光染料CellTracker CMFDA及Celloger^® Pro自動(dòng)活細(xì)胞成像系統(tǒng)，改善了檢測(cè)精度。

材料與方法：
靶細(xì)胞制備：

使用U-2OS細(xì)胞，分三種條件：
- 穩(wěn)定表達(dá)EGFP標(biāo)記的H2B；
- 使用Calcein-AM染色；
- 使用CellTracker CMFDA染色。
各組細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中染色后，于48孔板中以3×10⁴密度接種，并與NK-92效應(yīng)細(xì)胞按不同效應(yīng)/靶（E:T）比（5:1、10:1、20:1）共培養(yǎng)。
通過4倍物鏡的 Celloger^® Pro 在24h內(nèi)每間隔1h采集圖像，使用 Celloger^® 分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，通過紅綠熒光強(qiáng)度比值以評(píng)估NK細(xì)胞毒性。

結(jié)果：

圖 1. NK-92 與表達(dá) GFP:H2B 的 U-2OS 細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)
(A) NK-92 細(xì)胞與表達(dá) GFP:H2B 的 U-2OS 細(xì)胞按 5:1、10:1 和 20:1 的不同效應(yīng)物與靶標(biāo)（E:T）比例共培養(yǎng)。在 24 小時(shí)內(nèi)，每小時(shí)用配備 4 倍鏡頭的 Celloger® Pro 采集一次圖像。(B）圖中顯示了表達(dá) GFP:H2B 的 U-2OS 細(xì)胞在 24 小時(shí)內(nèi)的熒光強(qiáng)度比（紅/綠），比較了三種不同的 E:T 比率： 5:1、10:1 和 20:1。

圖 2. 用活細(xì)胞染色染料對(duì) U-2OS 細(xì)胞進(jìn)行的 NK-92 殺傷試驗(yàn)
(A、B）NK-92 細(xì)胞與 U-2OS 細(xì)胞共培養(yǎng)，用Calcein-AM（A）或 CellTracker CMFDA（B）染色，效應(yīng)物與靶標(biāo)（E:T）的比例分別為 5:1、10:1 和 20:1。在 24 小時(shí)內(nèi)每小時(shí)用 Celloger® Pro 4X 采集一次圖像。(C）圖中顯示了 U-2OS 細(xì)胞在 24 小時(shí)內(nèi)用Calcein-AM 或 CellTracker CMFDA 染色后的熒光強(qiáng)度比（紅/綠），比較了三種不同的 E:T 比率： 5:1、10:1 和 20:1。

圖 3. CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 的染色保留比較
(A)比較 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 在 U-2OS 細(xì)胞中 24 小時(shí)的染色保留時(shí)間的延時(shí)圖像。(B）圖中顯示的是歸一化綠色熒光強(qiáng)度值，比較了 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 隨時(shí)間變化的保留情況。

熒光標(biāo)記細(xì)胞： GFP-H2B靶細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)表明，隨著E:T比增加，紅熒光（死亡細(xì)胞）強(qiáng)度上升，綠熒光（活細(xì)胞）下降，且細(xì)胞聚集增多。
染料比較： CellTracker CMFDA在染料保持性及長(zhǎng)時(shí)間追蹤方面優(yōu)于Calcein-AM。CMFDA熒光信號(hào)穩(wěn)定超過12小時(shí)，避免了Calcein-AM的快速泄漏引起的誤差。
優(yōu)點(diǎn)總結(jié)： CellTracker CMFDA具有更高靈活性，適合快速高效的實(shí)驗(yàn)設(shè)置，而GFP表達(dá)細(xì)胞系雖精確但制備耗時(shí)且成本高。

亮點(diǎn)總結(jié)
1️⃣ 創(chuàng)新監(jiān)測(cè)方法：使用Celloger^® Pro自動(dòng)化活細(xì)胞成像系統(tǒng)，結(jié)合優(yōu)化染色試劑，實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)的NK細(xì)胞毒性分析。
2️⃣ 穩(wěn)定性對(duì)比：實(shí)驗(yàn)顯示CellTracker CMFDA染劑相較傳統(tǒng)Calcein-AM染劑，具有更高的細(xì)胞內(nèi)保留率和更低的漏染，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。
3️⃣ 實(shí)時(shí)觀察：Celloger^® Pro可直接觀測(cè)細(xì)胞形態(tài)變化及死亡過程，為細(xì)胞毒性研究提供更深層次的洞察。

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