前言

在PCR檢測過程中，不可否認的是，沒有任何檢測是100%準確的，比如我們可能也曾聽過假陽性這個名詞，那為什么會出現(xiàn)假陽性呢?這其實跟實驗操作過程造成的污染相關(guān)，在實驗開展過程中，主要有4種污染途徑：標本間交叉污染、PCR試劑污染、PCR擴增產(chǎn)物污染、實驗室克隆質(zhì)粒污染。

如何對污染進行監(jiān)測？

1. 陽性對照

在建立PCR實驗室及一般的檢驗單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對照，它是PCR 反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否符合理論要求的一個重要的參考標志，陽性對照要選擇擴增度中等、復性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標本，如以重組質(zhì)粒為陽性對照，其含量宜低不宜高(100個拷貝以下)，但陽性對照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽性標本，其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大，因而當某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗人員心中有數(shù)時，在以后的實驗中可免設(shè)陽性對照。

2. 陰性對照

每次PCR試驗務(wù)必做陰性對照，它包括：①標本對照，被檢標本是血清就用鑒定后的正常血清做對照，被檢的標本是組織細胞就用相應(yīng)的組織細胞做對照；②試劑對照，在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進行PCR擴增，以檢測試劑是否污染。

3. 重復性實驗

4. 選擇不同區(qū)域的引物進行PCR擴增

如何避免PCR污染？

實驗室防污染是重中之重，畢竟影響最終檢測結(jié)果，那么我們有哪些防污染的方法呢？

除了注意避免人工操作引入的污染，我們在實驗時應(yīng)設(shè)立適當?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ�，陽性對照以能出現(xiàn)擴增帶的最低量的標準病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應(yīng)都應(yīng)由一管不加模板的試劑對照及相應(yīng)不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。同時減少PCR循環(huán)次數(shù)，PCR產(chǎn)物達到檢測水平就適可而止。