Celigo成像分析技術(shù)在細胞增殖中的應(yīng)用
細胞增殖是腫瘤研究的必備實驗之一。最簡單直接的檢測細胞增殖的方法就是在不同時間點進行細胞計數(shù)，但是在96孔板甚至384孔板的實驗設(shè)置下，這無疑是難以操作的。于是，研究者們更傾向于用間接方法研究細胞增殖，比如基于線粒體內(nèi)脫氫酶還原能力的MTT, MTS, CCK-8法，還有基于胞內(nèi)ATP水平的CellTiter-Glo, ATPlite等。原理上，這些方法都是以細胞的代謝水平來代表細胞數(shù)量。但是大家有沒有懷疑過這些間接方法真能準確反映細胞的生長狀態(tài)嗎？
美國Genentech公司的科學家對這一問題進行了深入的研究。在2013年發(fā)表的一篇文獻中，作者選擇了兩種最常見的檢測細胞增殖的方法 – MTS和 CellTiter-Glo和直接細胞計數(shù)法進行比較，得到了意想不到的結(jié)果。
如上圖所示，HT29細胞被6種不同藥物處理48小時后用不同方法對細胞增殖進行了分析。從生長曲線來看，這三種方法得到的結(jié)果之間有不小的差異。比如Etoposide（ 細胞周期特異性的抗腫瘤藥），雖然最高與最低劑量得到的殺傷效率分別相同，但細胞計數(shù)與另兩種方法的曲線趨勢完全不同，所得IC50也小得多。又比如Gemcitabine（DNA合成抑制劑）, 細胞計數(shù)所測得的最高劑量殺傷效率比另兩種方法測得的要高得多�？傮w來說，與細胞計數(shù)相比較時，MTS和CellTiter-Glo會不同程度地低估藥物殺傷效率。
那造成這些差異的原因是什么呢？在文章的開頭我們提到了，MTS和CellTiter-Glo都是基于細胞代謝水平的檢測方法。這就出現(xiàn)了一個bug: 如果一種藥物直接對細胞代謝有影響，會有什么樣的結(jié)果呢？作者隨后進行了一系列深入研究，得出結(jié)論：當藥物造成細胞周期阻滯時，反映細胞代謝水平的信號與細胞數(shù)之間不再成線性關(guān)系。此時細胞內(nèi)的ATP和脫氫酶水平均會顯著上升，導致MTS和CellTiter-Glo得到更高的信號值，從而高估細胞數(shù)量。
謎題解開了，不過也給小伙伴們帶來了一個煩惱：今后如何再愉快地做細胞增殖實驗呢？手動數(shù)細胞實在太痛苦了。
美國Nexcelom公司的一款名為Celigo的神器了解一下：
謎題解開了，不過也給小伙伴們帶來了一個煩惱：今后如何再愉快地做細胞增殖實驗呢？手動數(shù)細胞實在太痛苦了。
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無標記細胞增殖只用到了Celigo的明場通道，也僅僅是該神器眾多應(yīng)用中最基本的一個。除了明場，Celigo還配置有4個熒光通道（藍、綠、紅和遠紅），為實驗的設(shè)計提供了無限可能。
目前Nexcelom已開發(fā)出在細胞健康、腫瘤免疫、病毒學、細胞株構(gòu)建、干細胞、3D腫瘤球檢測等領(lǐng)域的數(shù)十種Celigo應(yīng)用。感興趣的小伙伴們可以和我們聯(lián)系哦！
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