本期我們想說說懸浮細(xì)胞
比起貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞不需要消化
養(yǎng)起來更方便、省心
但也沒那么簡單
總是會遇到一點(diǎn)問題：
為什么總是出現(xiàn)死細(xì)胞，
說好了傳代很easy的，
冷凍、復(fù)蘇又出現(xiàn)問題了！

關(guān)于懸浮細(xì)胞，你知道多少？

• 懸浮細(xì)胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)。

• 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一般為淋巴細(xì)胞或血液系統(tǒng)來源的細(xì)胞（如人胃癌細(xì)胞SNU-5，小鼠白血病細(xì)胞WEHI-3, 人白血病細(xì)胞K-562, HL-60），這種細(xì)胞體積小，它們天生就生活在懸液（血液）中。由于缺乏黏附分子的表達(dá)，在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)，細(xì)胞大體呈球形或橢球型。

圖為K-562細(xì)胞，來源于ATCC

關(guān)于懸浮 de 傳代

1. 懸浮細(xì)胞無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個過程較為迅速，對細(xì)胞的損傷也較小。通常有兩種方法：

• 直接給帶傳代的培養(yǎng)瓶中補(bǔ)充一定量的新鮮培養(yǎng)基，然后分裝。

• 先通過離心棄掉營養(yǎng)匱乏的舊培養(yǎng)基，再用適量的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀。

2. 至于何時傳代，最準(zhǔn)確的是根據(jù)細(xì)胞密度來確定。傳代最大細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同而有所差異，ATCC細(xì)胞庫里提供的細(xì)胞培養(yǎng)信息，里面有培養(yǎng)條件選項，會詳細(xì)說明細(xì)胞的接種密度和培養(yǎng)密度，有的還有圖片或參考產(chǎn)品使用手冊。

如何有效去除死細(xì)胞？

細(xì)胞復(fù)蘇或培養(yǎng)過程中常會出現(xiàn)死細(xì)胞和細(xì)胞碎片，可通過低速離心的方法去除死細(xì)胞或細(xì)胞碎片，死亡細(xì)胞的碎片會留在上清中，即可除去。不同細(xì)胞離心力可能不一樣，可以先試一下300×g~500×g這個離心力，如果能離下大部分細(xì)胞就行，如果一點(diǎn)細(xì)胞都離不下來就適當(dāng)加大離心力和時間。

 BI教您做好懸浮細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇 

1. 凍存
我們推薦使用BI的無血清凍存液，直接按以下步驟進(jìn)行，操作更加方便，平均活細(xì)胞回收比例超過90%：

• 以200×g-300×g離心3分鐘，棄去上清，收集細(xì)胞。

• 用BI無血清凍存液將細(xì)胞重懸（不需回溫），將細(xì)胞密度調(diào)整為3~5x10⁶ cells/ml，添加到凍存管中（一般每管1ml）。

• 建議將含有細(xì)胞懸液的凍存管放入程序降溫盒或是保溫杯中，置于-80°C冰箱6小時以上或是過夜（或不需要程序降溫)。

• 將凍存管迅速移到液態(tài)氮?dú)庀嘀斜４妗?/p>

• 凍存24小時后，建議檢測細(xì)胞存活率。

2. 細(xì)胞的復(fù)蘇，BI建議按以下方法操作：

• 將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮?dú)庀嘀腥〕觯�置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。

• 在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融，使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。

• 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200×g~300×g，3分鐘離心收集細(xì)胞。

• 倒去上清液，重懸細(xì)胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

• 建議使用20%FBS復(fù)蘇細(xì)胞，等細(xì)胞長滿后，再降回原來血清比例。

END

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