人白細胞分化抗原4（CD4）ELISA試劑盒分析檢測說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：48T25ng/L-800ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本白細胞分化抗原4（CD4）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞分化抗原4（CD4）水平。用純化的人白細胞分化抗原4（CD4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞分化抗原4（CD4），再與HRP標記的白細胞分化抗原4（CD4）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞分化抗原4（CD4）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人白細胞分化抗原4（CD4）濃度。

試劑盒組成

    1.30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶；2.酶標試劑6ml×1瓶

    3.酶標包被板12孔×8條；4.樣品稀釋液6ml×1瓶

    5.顯色劑A液6ml×1瓶；6.顯色劑B液6ml×1/瓶

    7.終止液6ml×1瓶；8.標準品（48ng/ml）0.5ml×1瓶

    9.標準品稀釋液1.5ml×1瓶；10.說明書1份

    11.封板膜2張；12.密封袋1個

    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

    7.溫育：操作同3。

    8.洗滌：操作同5。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

    11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

ELISA試劑盒的優(yōu)勢：

    全面——混合8種不同的常見抗原，對自身免疫性疾病進行全面篩查。

    快速——檢測時間短（~2小時），確診時間更早。

    準確——ELISA檢測方法，靈敏度高，特異性強，適用性好。

    質(zhì)優(yōu)——美國技術開發(fā)，高品質(zhì)及高可靠性的分析性能。

    價低——國內(nèi)自生產(chǎn)，符合國內(nèi)實情，降低生產(chǎn)成本。

Elisa試劑盒組織結(jié)構：

    1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

    2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

    3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

    5、保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

注意事項：

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

    2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

    3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

    4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

    5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：；2-8℃。

    2．有效期：6個月