1.什么是中和抗體
 
中和抗體（Neutralizing Antibody,NAb）是一種特殊的抗體，可與細(xì)菌毒素、病原體(如病毒)及其產(chǎn)物特異性結(jié)合并發(fā)揮中和作用。病原微生物侵入機(jī)體時(shí)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，中和抗體能夠與病毒表面的抗原結(jié)合，并直接阻止病毒黏附靶細(xì)胞受體，防止病毒侵入細(xì)胞。也有將能夠與特定蛋白質(zhì)結(jié)合，并阻斷其功能的抗體稱為中和抗體。  
2.中和抗體的工作原理
中和抗體可以通過(guò)影響病原體表面的分子進(jìn)入體內(nèi)細(xì)胞的方式來(lái)阻止病原體感染人體。在包膜病毒（脂質(zhì)膜內(nèi)的熱敏病毒細(xì)胞）中，中和抗體會(huì)阻止病毒附著在細(xì)胞上以及病毒進(jìn)入細(xì)胞。在無(wú)包膜病毒（一種沒(méi)有脂質(zhì)膜的耐熱病毒細(xì)胞）中，中和抗體可以與衣殼蛋白結(jié)合，衣殼蛋白是包圍病毒細(xì)胞內(nèi)遺傳信息的蛋白質(zhì)外殼。
中和抗體還可以使病原體并改變其結(jié)構(gòu)和形狀（稱為構(gòu)象變化）以阻止其進(jìn)入細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。在細(xì)菌感染中，中和抗體可以阻止毒素的有害影響。這已被證明發(fā)生在白喉藥物中，盡管它們不再被推薦用于預(yù)防白喉感染。一旦病原體被 NAb 中和，病原體就會(huì)被白細(xì)胞降解，脾臟會(huì)過(guò)濾病原體，然后通過(guò)尿液或糞便排出體外。
 
3.中和抗體的應(yīng)用
中和抗體在醫(yī)學(xué)中的常見(jiàn)用途是被動(dòng)免疫。在此過(guò)程中，對(duì)疾病沒(méi)有免疫力的人從已經(jīng)對(duì)疾病免疫的人那里獲得抗體。這種保護(hù)不會(huì)持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間，但它確實(shí)可以立即保護(hù)和抵抗感染。在嬰兒出生后的頭幾個(gè)月，被動(dòng)免疫可以通過(guò)母乳喂養(yǎng)自然傳遞。
疫苗接種也利用中和抗體，這被稱為主動(dòng)免疫。疫苗旨在通過(guò)將病毒或細(xì)菌的活性標(biāo)本或部分病毒或細(xì)菌注射到體內(nèi)來(lái)模擬對(duì)感染的自然免疫反應(yīng)�？梢杂|發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生中和抗體以響應(yīng)疫苗中的病毒或細(xì)菌，如果人第二次接觸病原體，這些抗體將自然識(shí)別并抵抗感染。

4.中和抗體制備方法
目前有多種方法可用于中和抗體制備，包括雜交瘤技術(shù)，噬菌體展示技術(shù)，抗體人源化等。
 
5.卡梅德生物可以提供高質(zhì)量的牛中和抗體制備服務(wù)
卡梅德生物提供的中和抗體制備服務(wù)，只接受病毒樣品。以牛中和抗體制備為例，主要實(shí)驗(yàn)流程如下：抗原制備，動(dòng)物免疫，獲得�？寡�清，抗體純化，效價(jià)檢測(cè)，客戶交付血清。
 
 

 
 
5.1 抗原信息
客戶需要提供純病毒作為免疫源。
 
5.2 牛免疫
挑選24個(gè)月齡健康牛，通過(guò)肌肉注射的方式，按照免疫程序免疫4-5針，5ml/次，按照表1免疫進(jìn)程表進(jìn)行免疫。
表1 牛免疫規(guī)劃進(jìn)程表

流程	時(shí)間	描述	日期
陰性血清采集	Day 0	免疫前血清采集10mL	2022/08/05
一免	Day 1	5ml純病毒VT-101肌肉注射	2022/08/05
二免	Day 14	5ml純病毒VT-101肌肉注射	2022/08/19
三免	Day 28	5ml純病毒VT-101肌肉注射	2022/09/02
三免血清采集	Day 35	采集血清30ml寄送客戶	2022/09/09
四免	Day 42	5ml純病毒VT-101肌肉注射	2022/09/16
四免血清采集	Day 49	采集檢測(cè)血清10ml，檢測(cè)中和效價(jià)	2022/09/23
五免（可選）	Day 56	5ml純病毒VT-101肌肉注射	2022/09/30
五免血清采集	Day 63	采集檢測(cè)血清10ml，檢測(cè)中和效價(jià)	2022/10/07
血清采集	Day 73	滿足中和效價(jià)1:1024，采集牛血清2.5-3.5L	2022/10/17

 
5.3獲得�？寡�清
獲得高穩(wěn)定性抗體血清。
 
5.4抗體純化
采用多種抗體純化技術(shù)：Protein A、Protein G、抗原親和純化等方案可供客戶選擇。
 
5.5中和效價(jià)測(cè)定
（1）取三免和四免抗體血清，分別用1640完全培養(yǎng)基將抗體血清稀釋8倍，即得測(cè)定原液，用1640完全培養(yǎng)基連續(xù)倍比稀釋測(cè)定原液至2048倍（即稀釋至：16倍、32倍、64倍、128倍、256倍、512倍、1024倍、2048倍），包含測(cè)定原液共9個(gè)待測(cè)稀釋血清；
（2）取100ul不同濃度的稀釋血清分別與100ul病毒混合，同時(shí)加入800ul細(xì)胞培養(yǎng)基，混合后，置37℃水浴作用1h；
（3）取血清病毒混合液0. 1ml分別加到293T細(xì)胞已長(zhǎng)成單層的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每一稀釋度接種8孔細(xì)胞，同時(shí)設(shè)8孔正常細(xì)胞對(duì)照和8孔病毒對(duì)照；
（4）將96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置37℃、5% CO2溫箱中孵育，每日觀察細(xì)胞病變情況。
（5）無(wú)菌處理：將血清12000r/min離心20min，然后用0.45um濾膜過(guò)濾，最后超凈臺(tái)內(nèi)用0.22um無(wú)菌濾膜過(guò)濾，即得無(wú)菌血清。
 
5.6交付血清
可交付大規(guī)模達(dá)5L牛抗體血清。
 
中和抗體在抗病毒類藥物研發(fā)、疫苗生產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用。尤其自2019年新冠病毒爆發(fā)以來(lái)，已有多種新冠抗體中和藥物獲得批準(zhǔn)，作為預(yù)防和治療使用。卡梅德生物可以提供高特異性和親和力的中和抗體制備服務(wù)，其中牛中和抗體制備和鼠中和抗體制備已多次為客戶定制開(kāi)發(fā)服務(wù)，我們擁有完善的蛋白、抗體平臺(tái)，以為您科研之路添磚加瓦。