豆芽中4種植物生長素的UPLC/MS/MS測定（QuEChERS）
豆芽中4種植物生長素的UPLC/MS/MS測定（QuEChERS）
《BJS 201703 豆芽中植物生長激素的測定》
一、樣品提取
準確稱取 10.0 g 經(jīng)粉碎的豆芽置于50 mL離心管中，加入20 mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 渦旋混勻 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取鹽包(貨號：Q050025 )，立即手動振搖 30s，渦旋 2min；再以 5000r/min 離心5min，使乙腈和水分層，上層乙腈層待凈化。
二、樣品凈化
精密量取上層乙腈層5 mL置于 QuEChERS凈化管(貨號：Q015014 )15 mL凈化管中，2500 rpm 渦旋混勻 2min，以 5000 r/min 離心5 min，移取上層清液4 mL于另一 15 mL 離心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1mL，過 0.22 µm 尼龍濾膜供上機測試。
三、標曲配制
稱取空白豆芽樣品 10.0 g 按照上述一、二步驟操作，作為空白基質提取液；分別精密量取一定量的混合標準液加入到空白基質提取液中，用甲醇定容至 1 mL，配制成適當濃度的基質混合標準工作溶液。
四、儀器條件
色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色譜柱：OSD色譜柱 (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
流動相：A：5 mmol/L 乙酸銨
B：甲醇（0.1% 甲酸）
洗脫方式：梯度洗脫，見表 1
表 1 梯度洗脫程序
流速：0.3 mL/min 柱溫：35℃ 進樣量：5 µL
質譜條件
離子源：HESI 電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：35 arb 輔氣壓力：3 arb
離子傳輸管：380℃ 輔氣溫度：420℃
表 2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（* 為定量離子）
五、實驗結果
表 3 豆芽中 4 種植物生長激素加標回收結果（25.0 µg/kg）
豆芽中植物生長激素檢測色譜圖如下：
從上至下出峰順序依次為：4- 氯苯氧乙酸、2,4- 二氯苯氧乙酸、6- 芐基腺嘌呤、赤霉素。注意事項：
1. 該實驗采用 UPLC/MS/MS 檢測，對部分目標物有基質抑制效應，如 6- 芐基腺嘌呤，建議配制基質混合標準工作液進行定量，校正回收率。
2. 在標準《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液進行凈化，離心后取全部凈化液氮吹復溶，但在實際操作中，離心后實際氮吹復溶的凈化液體積不到 4 mL，會造成檢測結果偏低，建議取 5 mL 提取液凈化，再精密量取 4 mL 凈化液氮吹復溶
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《BJS 201703 豆芽中植物生長激素的測定》
一、樣品提取
準確稱取 10.0 g 經(jīng)粉碎的豆芽置于50 mL離心管中，加入20 mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 渦旋混勻 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取鹽包(貨號：Q050025 )，立即手動振搖 30s，渦旋 2min；再以 5000r/min 離心5min，使乙腈和水分層，上層乙腈層待凈化。
二、樣品凈化
精密量取上層乙腈層5 mL置于 QuEChERS凈化管(貨號：Q015014 )15 mL凈化管中，2500 rpm 渦旋混勻 2min，以 5000 r/min 離心5 min，移取上層清液4 mL于另一 15 mL 離心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1mL，過 0.22 µm 尼龍濾膜供上機測試。
三、標曲配制
稱取空白豆芽樣品 10.0 g 按照上述一、二步驟操作，作為空白基質提取液；分別精密量取一定量的混合標準液加入到空白基質提取液中，用甲醇定容至 1 mL，配制成適當濃度的基質混合標準工作溶液。
四、儀器條件
色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色譜柱：OSD色譜柱 (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
流動相：A：5 mmol/L 乙酸銨
B：甲醇（0.1% 甲酸）
洗脫方式：梯度洗脫，見表 1
表 1 梯度洗脫程序
| 時間 /min | A/% | B/% |
| 0 | 95 | 5 |
| 2.0 | 70 | 30 |
| 3.5 | 10 | 90 |
| 4.0 | 10 | 90 |
| 4.1 | 95 | 5 |
| 5.0 | 95 | 5 |
質譜條件
離子源：HESI 電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：35 arb 輔氣壓力：3 arb
離子傳輸管：380℃ 輔氣溫度：420℃
表 2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（* 為定量離子）
| 名稱 | 保留時間 /min | 母離子 | 子離子 |
| 赤霉素 | 3.22 | 344.9 | 133.0*，106.0 |
| 6- 芐基腺嘌呤 | 3.97 | 224.2 | 142.5*，238.9 |
| 4- 氯苯氧乙酸 | 3.45 | 184.8 | 161.0*，125.1 |
| 2,4- 二氯苯氧乙酸 | 3.86 | 218.9 | 126.7*，110.7 |
五、實驗結果
表 3 豆芽中 4 種植物生長激素加標回收結果（25.0 µg/kg）
| 目標物 | 回收率（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |||
| 赤霉素 | 96.96 | 88.74 | 96.19 | 91.44 | 93.3 | 4.2 |
| 6- 芐基腺嘌呤 | 83.47 | 86.42 | 90.84 | 83.81 | 86.1 | 3.9 |
| 4- 氯苯氧乙酸 | 93.66 | 87.35 | 89.32 | 86.91 | 89.3 | 3.4 |
| 2,4- 二氯苯氧乙酸 | 78.48 | 77.82 | 78.50 | 75.41 | 77.6 | 1.9 |
從上至下出峰順序依次為：4- 氯苯氧乙酸、2,4- 二氯苯氧乙酸、6- 芐基腺嘌呤、赤霉素。注意事項：
1. 該實驗采用 UPLC/MS/MS 檢測，對部分目標物有基質抑制效應，如 6- 芐基腺嘌呤，建議配制基質混合標準工作液進行定量，校正回收率。
2. 在標準《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液進行凈化，離心后取全部凈化液氮吹復溶，但在實際操作中，離心后實際氮吹復溶的凈化液體積不到 4 mL，會造成檢測結果偏低，建議取 5 mL 提取液凈化，再精密量取 4 mL 凈化液氮吹復溶
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| 貨號 | 描述 | 包裝 |
| Q050025 | 4g MgSO4+1g無水醋酸鈉，50 mL 離心管 | 50 支/盒 |
| Q015014 | 300mg MgSO4+100 mg C18，15 mL 離心管 | 50 支/盒 |
| YQ-CL200 | clover® 多管渦旋混勻儀 | 1 臺/箱 |
| CN13N22 | 尼龍 /Φ13 mm/0.22 µm/ 有機系 | 100 個/盒 |
| CN50M45 | MCE/Φ50 mm/0.45 µm/ 水系 | 100 片 /盒 |
| CN50N22 | NL 濾膜，直徑 50 mm，孔徑 0.22 µm，水系 | 100 片/盒 |
| CL-BC9002 | 2 mL 藍色聚丙烯蓋，預開口，9-425 | 100 個/盒 |
| CL-SB9004 | 2 mL 螺紋棕色樣品瓶，帶書寫處 11.6*32 mm，9-425 | 100 個/盒 |
標簽：
豆芽中生長激素的測定
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