藍靛果種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程！
 
⒈藍靛果
[Lonicera edulis Turcz.]別名藍靛果忍冬、藍果忍冬、藍果，俗稱山茄子、羊奶子、黑瞎子果，為忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，果實為藍色小漿果，具有很高的食用與保健價值�！�
⑴植物組織培養(yǎng)
在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞或原生質(zhì)體等，培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術(shù)。（GB/T 16620）
⑵外植體
用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細胞以及原生質(zhì)體等�！�
⑶培養(yǎng)基
根據(jù)植物營養(yǎng)原理與植物組織培養(yǎng)的要求人工配制的營養(yǎng)基質(zhì)。
⑷培養(yǎng)基母液
按試劑種類和性質(zhì)分別配制的高于培養(yǎng)基配方濃度的溶液。　
⑸植物生長物質(zhì)
調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的物質(zhì)，包括植物激素和植物生長調(diào)節(jié)劑。常用的植物生長物質(zhì)有生長素類似物IBA（吲哚丁酸）、6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）、NAA（萘乙酸）、KT（激動素）等。
⑹外植體滅菌
將外植體表面的微生物徹底殺死并盡可能少傷害外植體組織和表層細胞的過程�！�
⑺接種
將滅菌后的外植體在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基中的過程。
⑻誘導(dǎo)培養(yǎng)
將滅菌后的外植體接種到誘導(dǎo)愈傷組織等器官培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的過程。
⑼繼代培養(yǎng)
培養(yǎng)過程中將培養(yǎng)材料周期性地分株、分割等操作后，轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程。
⑽生根培養(yǎng)
將不定芽轉(zhuǎn)移到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生成完整植株的過程。
⑾移栽
組培苗在培養(yǎng)瓶中長出一定數(shù)量的根或根原基后，從瓶中取出移植到基質(zhì)中的過程。
 
⒉實驗設(shè)備
⑴滅菌設(shè)備
高壓蒸汽滅菌鍋、紫外燈。
⑵接種設(shè)備
超凈工作臺、槍式鑷子、眼科用解剖剪、解剖刀、酒精燈等。
⑶培養(yǎng)設(shè)備
培養(yǎng)容器瓶（罐頭瓶）、培養(yǎng)架、空調(diào)、照明燈管。
⑷實驗設(shè)備
電子天平（0.01mg）、冰箱、pH 5.0～7.0精密試紙、酸度計、溫濕度表、照度計、燒杯、試劑瓶、量筒、容量瓶、移液槍等。
 
⒊環(huán)境設(shè)備消毒滅菌
⑴接種室消毒滅菌
接種前用紫外燈照射30min，每周用高錳酸鉀及甲醛混合薰蒸。
⑵培養(yǎng)室消毒滅菌
每周用高錳酸鉀及甲醛混合薰蒸。
⑶超凈工作臺的消毒滅菌
接種前用紫外燈照射30min，并用70％酒精擦拭臺面，定期清洗超凈工作臺過濾膜。
⑷接種器具的消毒滅菌
使用前將槍式鑷子、解剖剪、培養(yǎng)皿、解剖刀進行高溫蒸汽消毒；接種過程中采用酒精燈灼燒消毒。
 
⒋組培育苗
⑴培養(yǎng)基制備
①母液配制及保存
選用化學(xué)純或分析純的化學(xué)藥品，根據(jù)MS培養(yǎng)基配方，分別配制大量元素（50倍）、微量元素（100倍）、鐵鹽（200倍）、有機物（100倍）、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（0.1～0.5mg/mL）幾種化合物的母液（見附件A.1和附件A.2），將母液保存在4℃的冰箱里。
②培養(yǎng)基配制
根據(jù)培養(yǎng)基配方需求，每升培養(yǎng)基中分別加入瓊脂粉（6.5g）、蔗糖（30g）和各類母液，依次溶解于蒸餾水，定容后用0.1mol/L HCl或0.1mol/L lNaOH溶液調(diào)節(jié)pH=5.8，定量分裝至培養(yǎng)瓶中并封口，制備成培養(yǎng)基，備用。培養(yǎng)基配制流程見下圖。
⑵培養(yǎng)基滅菌
瓶裝培養(yǎng)基在10h內(nèi)完成滅菌，滅菌方式采用高壓蒸汽滅菌，在壓力0.105MPa、溫度121℃條件下滅菌20min～30min。鍋內(nèi)的滅菌物以不超過鍋的容量3/4為宜，高壓滅菌時鍋內(nèi)使用蒸餾水。
⑶培養(yǎng)基保存
滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室，常溫條件下7d內(nèi)使用，2℃～4℃條件下14d內(nèi)使用。培養(yǎng)基應(yīng)保存于潔凈環(huán)境中，注意避光和防塵。
⑷外植體接種
①外植體的選擇
選擇生長健康、強壯的植株作為采樣母株，剪取母樹下部的半木質(zhì)化的莖段作為外植體，采樣時間宜選擇晴天或露水干后采集。
②外植體滅菌
先將外植體用洗滌劑作表面清洗，清除表面的塵土，再將外植體用流水沖洗30min后，將外植體放入消毒瓶中。把裝有外植體的消毒瓶放入超凈工作臺，在超凈工作臺上打開裝有外植體的消毒瓶，倒入70%酒精并搖晃消毒瓶，浸泡消毒10s，倒去酒精，用無菌水沖洗外植體3次～5次；然后用0.1% HgCl2浸泡8min，無菌水沖洗3次～5次，用無菌濾紙吸干外植體表面的水分。
③外植體切割
將表面消毒后的外植體切割，接入培養(yǎng)基中。莖在接種前用手術(shù)剪刀剪去兩端，長1.0 cm～2.0cm。
④外植體接種
操作時，先將培養(yǎng)瓶的封口膜輕輕取下，放在一邊，將培養(yǎng)瓶口在酒精燈外焰上旋轉(zhuǎn)灼燒消毒，殺死瓶口的微生物。將槍式鑷子在酒精燈上灼燒消毒并冷卻后，將外植體接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)瓶放3個外植體，接種后蓋上封口膜，并標(biāo)注日期。
⑸組培苗培養(yǎng)條件
培養(yǎng)室的溫度控制在25℃±3℃，相對空氣濕度控制在70%～80%，光照強度為27μmol•m-2•s-1～36μmol•m-2•s-1，光照時間為12h/d。
①誘導(dǎo)培養(yǎng)
將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基選用：MS基本培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L，培養(yǎng)20d～25d后進行繼代增殖培養(yǎng)。
②繼代增殖培養(yǎng)
外植體經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)生成愈傷組織或叢生芽，轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，繼代增殖培養(yǎng)基可選用：MS基本培養(yǎng)基+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L+KT 1.0 mg/L，培養(yǎng)30-35d。
③生根培養(yǎng)
選取培養(yǎng)瓶中長度1.5cm～3.0cm生長健壯的芽接種至生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基可選用：1/2MS基本培養(yǎng)基+NAA 0.5mg/L+IBA 1.0mg/L。培養(yǎng)25d～35d,組培苗生長過程中在基部會出現(xiàn)白色嫩根，25d后平均生根數(shù)3條以上，根長約在1.0cm～4.0cm。
⑹煉苗
①煉苗標(biāo)準(zhǔn)
當(dāng)組培幼苗基部長出3條以上長1.0cm～4.0cm的新根、苗高3～8cm，即可進行煉苗處理。
②組培苗馴化
將裝組培苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)架上輕輕取下，迅速轉(zhuǎn)移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃～25℃，每天中午在培養(yǎng)瓶周圍噴灑霧水，以保濕降溫，封口煉苗1d～2d。
③開瓶鍛煉
封口煉苗后打開瓶口，向瓶內(nèi)注入超過培養(yǎng)基表面0.5cm高的自來水，溫度控制在20℃～25℃，
2d～4d后即可移栽。
④組培苗質(zhì)量與分級
按照株高高矮分級，分2級，即苗高≦5cm和﹥5cm。
⑺移栽苗
用手指或鑷子輕輕取出組培苗，用清水洗去苗基部的培養(yǎng)基，移栽至裝有黑壤土、草碳土和細河沙（混合比例為2：1：1）的混合基質(zhì)的育苗盤中，育苗基質(zhì)中按每立方米基質(zhì)加入1kg磷酸二氫銨。育苗盤規(guī)格為35cm×50cm，育苗盤四壁高度不能低于7cm，育苗基質(zhì)放入育苗容器并澆透水后，厚度應(yīng)不小于5cm。
⑻移栽苗管理
育苗期保持育苗基質(zhì)見干見濕，育苗水分管理按照GB/T 6001進行。溫室空氣濕度應(yīng)保持70%～80%，溫度應(yīng)在18℃～25℃。
⑼病蟲害管理
藍靛果苗期病害主要為立枯病。主要防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作藥土防治，或50%多菌靈、70%甲基硫菌靈等作藥土防治，每平方米用藥8～9克；幼苗發(fā)病前期噴藥防治，選用70%土菌消（惡霉靈）可濕性粉1000倍液，或70%甲基硫菌靈可濕性粉劑800倍液，隔周噴施，共噴兩次。
蟲害主要是螞蟻。防治方法：應(yīng)在育苗床周邊撒一圈百蟲靈等驅(qū)蟻藥。

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