液相色譜儀的的使用注意事項與故障解決方法
液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發(fā)展的過程中，為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如，紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
一、對液相色譜儀的要求
⒈流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45μm或更細的膜過濾)。
⒉流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。
⒊不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。
⒋使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
⒌長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如，甲醇等)，因為，純水易長霉。
⒍每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。
⒎C18柱絕對不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。
⒏堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：
①以異丙醇作溶劑沖洗；
②放在異丙醇中間用超聲波清洗；
③用10％稀硝酸清洗；
⒐氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
⒑如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。
⒒要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。
⒓更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。
二、常見故障斷定及解決方法
⒈保留時間變化
⑴柱溫變化：柱恒溫，必要時需配置恒溫箱。
⑵等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動相平衡柱。
⑶緩沖液容量不夠：用》25mmol/L的緩沖液。
⑷柱污染：每天沖洗柱。
⑸柱內條件變化：穩(wěn)定進樣條件,調節(jié)流動相。
⑹柱快達到壽命：采用保護柱。
⒉保留時間縮短
⑴流速增加：檢查泵,重新設定流速。
⑵樣品超載：降低樣品量。
⑶鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。
⑷流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀。
⑸溫度增加：柱恒溫。
⒊保留時間延長
⑴流速下降：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡。
⑵硅膠柱上活性點變化：用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱。
⑶鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。
⑷流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀。
⑸溫度降低：柱恒溫。
⒋出現(xiàn)肩峰或分
⑴樣品體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%。
⑵樣品溶劑過強：采用較弱的樣品溶劑。
⑶柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件。
⑷柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品。
⑸進樣器損壞：更換進樣器轉子。
⒌鬼峰
⑴進樣閥殘余峰：每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗。
⑵樣品中未知物：處理樣品。
⑶柱未平衡：重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)。
⑷三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) ：每天新配,用抗氧化劑。
⑸水污染(反相) ：通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水。
⒍基線噪聲
⑴氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣：加柱后背壓。
⑵污染(隨機噪聲) ：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑。
⑶檢測器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈。
⑷電干擾(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)。
⑸檢測器中有氣泡：流動相脫氣,加柱后背壓。
⒎峰拖尾
⑴柱超載：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相。
⑵峰干擾：清潔樣品,調整流動相。
⑶硅羥基作用：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品。
⑷柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品。
⑸柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件。
⑹死體積或柱外體積過大：連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管。
⑺柱效下降：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。
⒏峰展寬
⑴進樣體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%。
⑵在進樣閥中造成峰擴展L進樣前后排出氣泡以降低擴散。
⑶數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 : 設定速率應是每峰大于10點。
⑷檢測器時間常數(shù)過大 : 設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%。
⑸流動相粘度過高 : 增加柱溫,采用低粘度流動相。
⑹檢測池體積過大 : 用小體積池,卸下熱交換器。
⑺保留時間過長 : 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫。
⑻柱外體積過大 : 將連接管徑和連接管長度降至最小。
⑼樣品過載 : 進小濃度小體積樣品。
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一、對液相色譜儀的要求
⒈流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45μm或更細的膜過濾)。
⒉流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。
⒊不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。
⒋使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
⒌長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如，甲醇等)，因為，純水易長霉。
⒍每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。
⒎C18柱絕對不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。
⒏堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：
①以異丙醇作溶劑沖洗；
②放在異丙醇中間用超聲波清洗；
③用10％稀硝酸清洗；
⒐氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
⒑如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。
⒒要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。
⒓更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。
二、常見故障斷定及解決方法
⒈保留時間變化
⑴柱溫變化：柱恒溫，必要時需配置恒溫箱。
⑵等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動相平衡柱。
⑶緩沖液容量不夠：用》25mmol/L的緩沖液。
⑷柱污染：每天沖洗柱。
⑸柱內條件變化：穩(wěn)定進樣條件,調節(jié)流動相。
⑹柱快達到壽命：采用保護柱。
⒉保留時間縮短
⑴流速增加：檢查泵,重新設定流速。
⑵樣品超載：降低樣品量。
⑶鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。
⑷流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀。
⑸溫度增加：柱恒溫。
⒊保留時間延長
⑴流速下降：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡。
⑵硅膠柱上活性點變化：用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱。
⑶鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。
⑷流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀。
⑸溫度降低：柱恒溫。
⒋出現(xiàn)肩峰或分
⑴樣品體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%。
⑵樣品溶劑過強：采用較弱的樣品溶劑。
⑶柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件。
⑷柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品。
⑸進樣器損壞：更換進樣器轉子。
⒌鬼峰
⑴進樣閥殘余峰：每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗。
⑵樣品中未知物：處理樣品。
⑶柱未平衡：重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)。
⑷三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) ：每天新配,用抗氧化劑。
⑸水污染(反相) ：通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水。
⒍基線噪聲
⑴氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣：加柱后背壓。
⑵污染(隨機噪聲) ：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑。
⑶檢測器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈。
⑷電干擾(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)。
⑸檢測器中有氣泡：流動相脫氣,加柱后背壓。
⒎峰拖尾
⑴柱超載：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相。
⑵峰干擾：清潔樣品,調整流動相。
⑶硅羥基作用：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品。
⑷柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品。
⑸柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件。
⑹死體積或柱外體積過大：連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管。
⑺柱效下降：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。
⒏峰展寬
⑴進樣體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%。
⑵在進樣閥中造成峰擴展L進樣前后排出氣泡以降低擴散。
⑶數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 : 設定速率應是每峰大于10點。
⑷檢測器時間常數(shù)過大 : 設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%。
⑸流動相粘度過高 : 增加柱溫,采用低粘度流動相。
⑹檢測池體積過大 : 用小體積池,卸下熱交換器。
⑺保留時間過長 : 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫。
⑻柱外體積過大 : 將連接管徑和連接管長度降至最小。
⑼樣品過載 : 進小濃度小體積樣品。
國家標準物質資源平臺主營化學試劑（高端試劑、通用試劑、分析試劑）、標準品、對照品對照藥材、實驗色譜耗材、儀器裝置等近20萬種貨品。另biobw.com代理引進國內外知名供應商，從質量檢測、商品入庫管理、專業(yè)保存、物流運輸、售后服務等，各個環(huán)節(jié)均由專業(yè)人士把控。通過線上運營及自送物流，將節(jié)省的3%-5%的成本回饋給客戶，保證產(chǎn)品質優(yōu)價廉。進口品牌有美國ACC，美國USP，德國DR，德國weitge，加拿大TRC，加拿大CDN，BEPURE等多個知名品牌，貨期短，價位低。點擊在線客服即可咨詢購買事宜。
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