雜交瘤技術(shù)仍然是單克隆抗體發(fā)現(xiàn)的主要技術(shù),尤其是在治療性抗體藥物治療領(lǐng)域,相比噬菌體、酵母等非天然文庫,具有成藥性好、特異性強等特點。由于雜交瘤獲得的單克隆抗體,系經(jīng)過哺乳動物細胞自然進化篩選獲得的序列,因此其通常不會遇到表達困難、產(chǎn)量低、非特異性結(jié)合等問題。
雜交瘤技術(shù)具有以下挑戰(zhàn):
1. 對于免疫原性低的抗原,抗體滴度低、難以產(chǎn)生中和抗體;
2. 融合效率低、難以獲得低豐度存在的克;
3. 抗體親和力低、表位分布局限。
針對以上局限性,啟文生物提出了以下優(yōu)化方案:
1. 針對低免疫原性抗原,免疫增強佐劑提高抗體效價
方法:我們的免疫增強佐劑在CFA等傳統(tǒng)佐劑的基礎(chǔ)上拓展T細胞的抗原表位識別,進而擴展抗體的表位
結(jié)果:多次試驗表明,初始免疫后,效價可提高5~10倍。
2. 針對融合時陽性率較低的現(xiàn)象,陽性克隆佐劑增強B細胞豐度
方法:在Pre-fusion boost階段,我們的陽性克隆佐劑可以增強陽性克隆在B細胞中的豐度,通過提高陽性率,從而幫助融合到稀有的克隆
結(jié)果:多次試驗表明,對于大多數(shù)抗原,改方法可以提高陽性率3~5倍。
3.專用培養(yǎng)體系提高融合效率
方法:我們提供經(jīng)馴化的小鼠SP2/0細胞和雜交瘤細胞專用培養(yǎng)血清。對于結(jié)合先進的電融合技術(shù)來說,我們自產(chǎn)的電融合緩沖液的實驗效果和進口產(chǎn)品相當(dāng)。
結(jié)果:根據(jù)客戶反饋,融合效率最高可達1 : 1000,通?梢宰龅1 : 4000以上。如果結(jié)合融合處理液一起使用,可以進一步提高融合效率(融合效率提升3~5倍)。
4. 雜交瘤細胞增強培養(yǎng)基提高克隆生長率
方法:在雜交瘤細胞電融合之后的克隆篩選和生長階段,我們提供雜交瘤細胞增強培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有多種促進雜交瘤細胞生長的細胞因子。
結(jié)果:可以提高克隆生長率近10倍。
對于聚乙二醇法和電融合法來說,我們的大多數(shù)試劑都是通用的。具體種類如下表所示:
相關(guān)試劑圖片: