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客戶細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明【賽百慷】

瀏覽次數(shù):3742 發(fā)布日期:2017-8-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

通過多次與客戶的了解和反饋,賽百慷的售后服務(wù)人員發(fā)現(xiàn),客戶在收到經(jīng)過專業(yè)包裝的細(xì)胞后,由于沒有經(jīng)過系統(tǒng)專業(yè)的檢查和處理,就直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以致于后期容易產(chǎn)生了一系列問題。鑒于客戶對這一方面的知識(shí)有所欠缺薄弱,賽百慷的技術(shù)人員經(jīng)過總結(jié),對于在收到細(xì)胞怎樣專業(yè)處理做了以下說明:

一、問:細(xì)胞收到之后怎么處理?

答:常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞

首先觀察包裝是否完好,瓶口是否漏液,然后顯微鏡先拍攝4x 、10x、 40x不同倍數(shù)下的照片各兩張。放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定兩小時(shí)后開始換液,貼壁細(xì)胞把培養(yǎng)基全部吸去,加入6ml新的完全培養(yǎng)基,懸浮細(xì)胞離心后,用6ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。注意細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境。

低溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞,通常是用干冰寄送。

客戶收到細(xì)胞后,觀察干冰是否揮發(fā),細(xì)胞是否溶解。沒有問題可以直接放入液氮罐保存(長時(shí)間),或者超低溫冰箱(不超過一周)。

二、問:細(xì)胞凍存后,復(fù)蘇效果不好?

答:目前還有很多人采取4°、﹣20°各半小時(shí)再轉(zhuǎn)入-80°冰箱,這方法不好控制,有的細(xì)胞適合,有的細(xì)胞就達(dá)不到理想效果。現(xiàn)可采用程序降溫盒來凍存,降溫盒內(nèi)添加的異丙醇可以達(dá)到每分鐘降一度的要求,操作也簡單。

凍存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干細(xì)胞可以添加馬血清凍存,另外可以先將凍存液配置成80%血清+20%DMSO,重懸細(xì)胞時(shí)用血清重懸,避免直接用DMSO對細(xì)胞吹打造成損傷。

三、問:細(xì)胞有黑點(diǎn)怎么回事?

答:這種情況可能性就比較多了,首先判斷黑點(diǎn)是在細(xì)胞表面,還是胞質(zhì)內(nèi),還是在細(xì)胞外。細(xì)胞表面黑點(diǎn)增多可能是因?yàn)闋顟B(tài)變差,可能是培養(yǎng)條件不適合導(dǎo)致,或者細(xì)胞活性降低。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)黑點(diǎn)增多,先確認(rèn)是否是多核細(xì)胞。細(xì)胞外有黑點(diǎn),黑點(diǎn)游動(dòng)則可能是細(xì)菌污染,不游動(dòng)但隨著培養(yǎng)時(shí)間增長黑點(diǎn)數(shù)量增多,應(yīng)該檢測是不是支原體污染,懸浮細(xì)胞多數(shù)有黑點(diǎn),可能是碎片,可低速離心去除。腺癌多數(shù)是分泌因子,看著黑點(diǎn)增多。

四、培養(yǎng)基,血清怎么選?

答:最好和細(xì)胞來源用的什么品牌使用相同的血清;A(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)口和國產(chǎn)差別不大。專業(yè)的細(xì)胞公司使用的血清都是經(jīng)過了大量細(xì)胞培養(yǎng)驗(yàn)證的,不要輕易更換,目前國內(nèi)血清品牌較多,質(zhì)量不齊。

發(fā)布者:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司
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