報告基因檢測是功能基因組學研究的一個重要手段，在真核基因表達調(diào)控研究和相關藥物或蛋白篩選工作中，有廣泛的應用。報告基因檢測系統(tǒng)，是把順式調(diào)控元件（即DNA非編碼序列）與某一種非常容易被鑒定的蛋白（即報告基因產(chǎn)物）的編碼序列連接起來，通過測定該報告基因在細胞內(nèi)的表達產(chǎn)物的量或活性，來判斷順式調(diào)控元件的表達調(diào)控作用。這種間接的測定技術，提供了一種簡單、有效、有時是唯一可行的檢測體系。報告基因檢測技術，涉及報告基因載體質(zhì)粒構建、細胞轉(zhuǎn)染、報告基因產(chǎn)物測定等方法。

 

理想的報告基因通常應具備以下特點：已被克隆和全序列已測定；表達產(chǎn)物在受體細胞中不存在（即無背景）；細胞內(nèi)其它的基因產(chǎn)物不會干擾報告基因產(chǎn)物的檢測；基因產(chǎn)物在細胞內(nèi)的含量能夠?qū)崟r反映該基因的轉(zhuǎn)錄活性狀態(tài)；報告基因編碼產(chǎn)物的檢測方法應該快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性好。

 

目前實驗室較為常用的報告基因有以下幾種：熒光素酶（luc）、β-半乳糖苷酶（β-gal）、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT）、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）、分泌型堿性磷酸酶（SEAP）、綠色熒光蛋白（GFP）以及生長激素（hGH）等。其中熒光素酶報告基因具有檢測速度快、靈敏度高、費用低等優(yōu)點，得到了最為廣泛的采用。在報告基因檢測體系中，報告基因的活性與特異性刺激互相影響。因此除了主報告基因質(zhì)粒外，通常還需包含另一種報告基因質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染同一細胞，以作為轉(zhuǎn)染效率和細胞數(shù)量、狀態(tài)的內(nèi)參照，使主報告基因的結果歸一化。