RINTDF方法相較于綜合TDF方法的優(yōu)勢
RINTDF方法（AOAC 2017.16和AOAC 2022.01）相較于綜合TDF方法（AOAC 2009.01）的優(yōu)勢
為了克服集成TDF方法報告的所有局限性，調整后創(chuàng)建了RINTDF方法。RINTDF在2016年接受了實驗室間評估，并在2018年被接受為AOAC方法2017.16，在2022年被接受為AOAC方法2022.01。
較短的孵育時間：在整合的總膳食纖維（TDF）方法中，與胰α-淀粉酶（PAA）和淀粉葡萄糖苷酶（AMG）的孵育時間為16小時，與已發(fā)表的測量抗性淀粉（RS）的方法一致。然而，食物在小腸中的停留時間更可能是約4小時，這是在快速整合總膳食纖維（RINTDF）中使用的時間。為了獲得與AOAC方法2009.01在16小時內對一系列對照淀粉/抗性淀粉的水解程度相同，RINTDF方法中PAA和AMG的水平需要大幅增加（PAA從2 KU/檢測增加到5 KU/檢測，AMG從0.14 KU/檢測增加到1.7 KU/檢測）。
避免RMD偽影：已有報告在使用整合TDF方法水解某些淀粉時會產生少量的抗性麥芽糊精。這些寡糖在分析方法中對進一步水解具有抗性，但容易被小腸粘膜的α-葡萄糖苷酶復合體水解——因此它們是由分析方法產生的偽影，不應包括在膳食纖維（DF）中。在RINTDF采用的修訂孵育條件下，水解淀粉時不會形成有問題的抗性麥芽糊精。
提高RS4的準確性：整合TDF方法的結果顯示對磷酸交聯淀粉（Resistance Starch 4，RS4）有些低估。雖然使用RINTDF獲得的結果與使用整合TDF方法獲得的結果非常相似，但對于某些磷酸交聯淀粉樣品（如Fibersym®）和天然高直鏈玉米淀粉（例如Hylon VII®），獲得了更高（更具生理相關性）的值。
提高FOS的準確性：使用整合TDF方法時，當使用所選的HPLC系統(tǒng)（Waters Sugar-Pak®柱）時，低聚果糖（FOS）也被低估，因為果糖三糖與二糖共洗脫，因此無法測量。為了實現果糖三糖（在FOS中）與二糖的完全分離，改用Tosoh Biosciences LLC的TSKgel G2500PWxL®凝膠滲透柱進行HPLC（如Matsutani Chemical Company推薦的），而不是使用Waters Corporation的Sugar-Pak®柱。使用甘油作為內標物代替山梨醇，因為在TSKgel G2500PWxL®柱上，山梨醇與葡萄糖共洗脫。這導致需要從酶制劑中排除甘油，這已在快速整合總膳食纖維檢測試劑盒（K-RINTDF）中實現。
更安全的配方：K-INTDF在孵育緩沖液中使用了疊氮鈉以防止16小時孵育期間的微生物污染。鑒于疊氮鈉具有顯著的毒性，這是不可取的。由于RINTDF使用的孵育時間較短，孵育溶液的微生物感染不是問題，這意味著可以從孵育緩沖液中排除疊氮鈉。
為了克服集成TDF方法報告的所有局限性，調整后創(chuàng)建了RINTDF方法。RINTDF在2016年接受了實驗室間評估，并在2018年被接受為AOAC方法2017.16，在2022年被接受為AOAC方法2022.01。
較短的孵育時間：在整合的總膳食纖維（TDF）方法中，與胰α-淀粉酶（PAA）和淀粉葡萄糖苷酶（AMG）的孵育時間為16小時，與已發(fā)表的測量抗性淀粉（RS）的方法一致。然而，食物在小腸中的停留時間更可能是約4小時，這是在快速整合總膳食纖維（RINTDF）中使用的時間。為了獲得與AOAC方法2009.01在16小時內對一系列對照淀粉/抗性淀粉的水解程度相同，RINTDF方法中PAA和AMG的水平需要大幅增加（PAA從2 KU/檢測增加到5 KU/檢測，AMG從0.14 KU/檢測增加到1.7 KU/檢測）。
避免RMD偽影：已有報告在使用整合TDF方法水解某些淀粉時會產生少量的抗性麥芽糊精。這些寡糖在分析方法中對進一步水解具有抗性，但容易被小腸粘膜的α-葡萄糖苷酶復合體水解——因此它們是由分析方法產生的偽影，不應包括在膳食纖維（DF）中。在RINTDF采用的修訂孵育條件下，水解淀粉時不會形成有問題的抗性麥芽糊精。
提高RS4的準確性：整合TDF方法的結果顯示對磷酸交聯淀粉（Resistance Starch 4，RS4）有些低估。雖然使用RINTDF獲得的結果與使用整合TDF方法獲得的結果非常相似，但對于某些磷酸交聯淀粉樣品（如Fibersym®）和天然高直鏈玉米淀粉（例如Hylon VII®），獲得了更高（更具生理相關性）的值。
提高FOS的準確性：使用整合TDF方法時，當使用所選的HPLC系統(tǒng)（Waters Sugar-Pak®柱）時，低聚果糖（FOS）也被低估，因為果糖三糖與二糖共洗脫，因此無法測量。為了實現果糖三糖（在FOS中）與二糖的完全分離，改用Tosoh Biosciences LLC的TSKgel G2500PWxL®凝膠滲透柱進行HPLC（如Matsutani Chemical Company推薦的），而不是使用Waters Corporation的Sugar-Pak®柱。使用甘油作為內標物代替山梨醇，因為在TSKgel G2500PWxL®柱上，山梨醇與葡萄糖共洗脫。這導致需要從酶制劑中排除甘油，這已在快速整合總膳食纖維檢測試劑盒（K-RINTDF）中實現。
更安全的配方：K-INTDF在孵育緩沖液中使用了疊氮鈉以防止16小時孵育期間的微生物污染。鑒于疊氮鈉具有顯著的毒性，這是不可取的。由于RINTDF使用的孵育時間較短，孵育溶液的微生物感染不是問題，這意味著可以從孵育緩沖液中排除疊氮鈉。
標簽：
總膳食纖維檢測試劑盒
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