原創(chuàng)：檢驗(yàn)君 文章來(lái)源：檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)

近年來(lái)，腫瘤生物標(biāo)志物的研究取得了顯著的進(jìn)展，為腫瘤早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供了重要依據(jù)。然而，目前仍有許多挑戰(zhàn)和問(wèn)題亟待解決，如生物標(biāo)志物的特異性、敏感性以及檢測(cè)方法的便捷性和準(zhǔn)確性等。因此，深入研究腫瘤生物標(biāo)志物及其檢測(cè)方法具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

今天，檢驗(yàn)君為大家?guī)��?lái)的是四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授團(tuán)隊(duì)關(guān)于腫瘤生物標(biāo)志物及檢測(cè)方法的研究前沿。

γδT細(xì)胞在甲狀腺癌免疫治療中的作用

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌惡性腫瘤，在過(guò)去幾十年中發(fā)病率持續(xù)上升。γδT細(xì)胞是進(jìn)化上保守的T淋巴細(xì)胞，表現(xiàn)出獨(dú)立于腫瘤突變負(fù)荷（TMB）和常規(guī)人類白細(xì)胞抗原（HLA）識(shí)別的獨(dú)特抗腫瘤功效。然而，它們的T細(xì)胞受體（TCR）在癌癥進(jìn)展和治療過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化仍不清楚。

近日，四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科羅晗教授、應(yīng)斌武教授，甲狀腺外科李志輝教授團(tuán)隊(duì)聯(lián)合韓國(guó)GIST研究院Jihwan Park教授的一項(xiàng)研究闡述了γδT細(xì)胞不僅可以作為區(qū)分良惡性甲狀腺結(jié)節(jié)的非侵入性的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，還能作為免疫治療響應(yīng)的標(biāo)志物。該研究發(fā)表在Advanced Science（IF: 15.1）。

目前甲狀腺癌管理主要存在兩大關(guān)鍵臨床問(wèn)題，一是良惡性結(jié)節(jié)的鑒別診斷；二是甲狀腺癌去分化的早期診斷。濾泡細(xì)胞來(lái)源的甲狀腺癌具有多種分化程度不同的類型，包括分化良好的甲狀腺乳頭狀癌（PTC），低分化甲狀腺癌（PDTC）和未分化甲狀腺癌（ATC）等。隨著分化程度降低，患者的預(yù)后也越來(lái)越差，中位生存期顯著下降。因此，甲狀腺癌去分化早期診斷尤為重要。該研究采用“一橫一縱”的隊(duì)列設(shè)計(jì)，通過(guò)TCR測(cè)序和分子機(jī)制研究，對(duì)健康人群和甲狀腺癌各種類型的外周血γδTCR免疫組庫(kù)進(jìn)行了全面表征，并且縱向追蹤了不同抗腫瘤治療下去分化甲狀腺癌患者γδT細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。

橫斷面研究顯示，健康人群和甲狀腺癌患者外周血γδ TCR具有明顯差異。同時(shí)，伴隨著去分化進(jìn)展，γδ TCR的多樣性顯著下降，克隆性增加，而且在去分化患者中，Vδ2+/neg和Vγ9+/neg各個(gè)亞群存在明顯的寡克隆現(xiàn)象。此外，縱向研究顯示，在甲狀腺癌抗腫瘤治療中，TKI（酪氨酸激酶抑制劑）+放療+PD-1抗體治療三聯(lián)療法療效最佳，且與Vδ2neg亞群的擴(kuò)增存在顯著相關(guān)。在TKI治療期間（T2-T4），Vγ9+/neg和Vδ2+/neg亞群中的新生TCRexp克隆占比相似，均維持較低水平。但在放療后的PD-1抗體治療期間，新生Vδ2neg亞群明顯擴(kuò)增，顯著高于其他亞群。

總之，該研究表明外周血γδ TCR的特定CDR3序列有望成為新型結(jié)節(jié)良惡性鑒別診斷和去分化早期判定的診斷標(biāo)志物，Vδ2neg亞群的擴(kuò)增可能與放療后免疫療法良好治療反應(yīng)相關(guān)。

人源唾液生物標(biāo)志物檢測(cè)在臨床診斷中的應(yīng)用前景

唾液是一種非侵入性的生物樣本，富含各種物質(zhì)，可以反映人體的健康狀況。近年來(lái)，唾液生物標(biāo)志物檢測(cè)在口腔疾病、糖尿病、腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等多種疾病的診斷和監(jiān)測(cè)中顯示出了巨大的潛力。

近日，四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授團(tuán)隊(duì)的一篇綜述回顧了不同類型生物標(biāo)志物類別的最新進(jìn)展，揭示了唾液檢測(cè)在臨床疾病診斷中的應(yīng)用前景。該研究發(fā)表在International Journal of Oral Science（IF：14.9）。

該文章按照不同類型的生物標(biāo)志物，如細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA、蛋白質(zhì)和激素等，回顧了唾液生物標(biāo)志物檢測(cè)的最新進(jìn)展。介紹了唾液生物標(biāo)志物檢測(cè)的技術(shù)和方法，如基于核酸的檢測(cè)、基于蛋白質(zhì)的檢測(cè)、基于外泌體的檢測(cè)等，以及它們的優(yōu)缺點(diǎn)和應(yīng)用范圍。文章指出，唾液生物標(biāo)志物檢測(cè)的技術(shù)和方法應(yīng)該根據(jù)不同的目的和需求進(jìn)行選擇和優(yōu)化，以提高其靈敏度、特異性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性。

RNA生物標(biāo)志物在各種疾病中的研究最為廣泛。然而，在該研究團(tuán)隊(duì)看來(lái)，激素是臨床診斷中最有前途的標(biāo)志物。需要進(jìn)行未來(lái)的研究，以克服晝夜節(jié)律造成的波動(dòng)，并使用方便的可穿戴或便攜式設(shè)備來(lái)監(jiān)測(cè)患者的動(dòng)態(tài)變化。這將對(duì)需要多次檢測(cè)且難以獲得血液或其他類型體液的患者大有裨益。

免疫基因變異可預(yù)測(cè)PD-1/PD-L1抑制劑的免疫相關(guān)不良反應(yīng)

PD-1/PD-L1抑制劑已經(jīng)在多種實(shí)體瘤的治療中顯示出了顯著的效果，但是也有一部分患者會(huì)出現(xiàn)不同程度的免疫相關(guān)不良事件（irAE）。目前，還沒(méi)有有效的方法可以在治療前預(yù)測(cè)患者是否會(huì)出現(xiàn)irAEs，以及出現(xiàn)的類型和嚴(yán)重程度。

日前，四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授、周娟教授、陳捷教授團(tuán)隊(duì)的一項(xiàng)研究在接受PD-1/PD-L1阻斷治療腫瘤患者中發(fā)現(xiàn)了一些免疫基因變異與irAEs的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，可作為其潛在的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。該研究發(fā)表在European Journal of Cancer（IF：8.4）。

該研究團(tuán)隊(duì)招募接受PD-1/PD-L1抑制劑治療的實(shí)體瘤患者進(jìn)行隨訪研究，使用多重基因分型測(cè)定對(duì)18個(gè)基因的39個(gè)變異進(jìn)行了基因分型，進(jìn)行遺傳變異與irAE以及無(wú)irAEs生存期之間的關(guān)聯(lián)分析。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種免疫遺傳學(xué)變異與irAEs的發(fā)生有顯著的相關(guān)性，其中，絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）rs3810610的C等位基因是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子，而PTPRC rs6428474的A等位基因則是所有級(jí)別irAE的保護(hù)因子。ADAD1 rs17388568的A等位基因增加了風(fēng)險(xiǎn)，而IL6 rs1800796的G等位基因保護(hù)患者免受高級(jí)irAE的影響。在PD-1阻斷或肺癌癌癥亞群中，顯著的免疫遺傳變異達(dá)到了類似的趨勢(shì)。在多變量Cox回歸分析中，MAPK1 rs3810610是有關(guān)所有級(jí)別irAE無(wú)生存率的獨(dú)立因素。ADAD1 rs17388568和IL6 rs1800796是高級(jí)別irAE無(wú)生存率的自變量。

總之，該研究首先確定了4種免疫遺傳變異作為所有級(jí)別或高級(jí)irAE的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物。值得注意的是，這些基因變異不僅與irAE的易感性有關(guān)，而且可能表明PD-1/PD-L1抑制劑治療后無(wú)irAE的存活率。該研究結(jié)果為探索未來(lái)免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療產(chǎn)生的免疫相關(guān)毒性的潛在機(jī)制提供了新的見(jiàn)解。

SNHG家族lncRNAs選擇性剪接改變snoRNA表達(dá)并誘導(dǎo)肝母細(xì)胞瘤耐藥

肝母細(xì)胞瘤（HB）是一種常見(jiàn)的兒童惡性肝腫瘤，其特征是基因突變水平較低。選擇性剪接（AS）已被證明與癌癥進(jìn)展密切相關(guān)，尤其是在突變負(fù)擔(dān)較低的腫瘤中。然而，AS在HB中的作用仍然未知。

日前，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心潘秋輝教授、海軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院（上海長(zhǎng)征醫(yī)院）周琳教授、四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授、同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院孫奮勇教授聯(lián)合的一項(xiàng)研究揭示了內(nèi)含子保留在HB中調(diào)節(jié)小核仁RNA宿主基因（snoRNA）表達(dá)的作用，解釋了PABPN1和SNHG RNA內(nèi)含子保留之間的詳細(xì)調(diào)節(jié)機(jī)制，并為開(kāi)發(fā)新的HB治療方案提供了見(jiàn)解。該研究發(fā)表在Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology（IF：7.2）。

該研究對(duì)5對(duì)HB組織和匹配的非腫瘤組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，以描繪HB中的AS景觀。在來(lái)自46名患者的92個(gè)樣本中驗(yàn)證了AS事件。進(jìn)行RNA下拉和RNA免疫沉淀分析以鑒定調(diào)節(jié)小核仁RNA宿主基因（SNHG）AS的剪接因子。同時(shí)建立了患者來(lái)源的類器官（PDO），以研究剪接因子聚腺苷酸結(jié)合核蛋白1（PABPN1）的作用。

結(jié)果揭示了HB中異常的選擇性剪接，包括來(lái)自SNHG家族的lncRNA，這些lncRNA在HB中經(jīng)歷內(nèi)含子保留。進(jìn)一步的研究表明，一種顯著上調(diào)的RNA結(jié)合蛋白PABPN1，與HB中的剪接機(jī)制相互作用，誘導(dǎo)這些SNHG RNA的內(nèi)含子保留和snoRNA的下調(diào)。在功能上，PABPN1通過(guò)誘導(dǎo)SNHG19的內(nèi)含子保留來(lái)促進(jìn)細(xì)胞增殖和DNA損傷修復(fù)，從而在HB中充當(dāng)癌胚剪接調(diào)節(jié)因子。敲除PABPN1可增加HB-PDO對(duì)順鉑的敏感性。

總之，該研究從AS的角度對(duì)HB發(fā)病機(jī)制的分子機(jī)制提供了新的見(jiàn)解，并證明了PABPN1作為癌胚剪接調(diào)節(jié)因子在HB中的重要作用。

免疫遺傳多態(tài)性可預(yù)測(cè)接受PD-1/PD-L1阻斷治療腫瘤患者的療效

PD-1/PD-L1阻斷是一種有效的免疫治療方法，可以通過(guò)解除腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫細(xì)胞的抑制，激活腫瘤免疫反應(yīng)。然而，PD-1/PD-L1阻斷的治療效果在不同的腫瘤類型和患者之間存在巨大的差異，目前還沒(méi)有有效的生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)哪些患者能夠從PD-1/PD-L1阻斷中獲益。

近日，四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授、周娟教授團(tuán)隊(duì)的一項(xiàng)研究，探討了免疫遺傳多態(tài)性與PD-1/PD-L1阻斷的治療效果和腫瘤患者生存的關(guān)系。該研究發(fā)表在International Immunopharmacology（IF：5.6）。

該研究招募了接受PD-1/PD-L1阻斷的腫瘤患者共計(jì)318名并進(jìn)行隨訪。通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)和Cytoscape中的算法過(guò)濾與腫瘤免疫相關(guān)的關(guān)鍵基因。最后，通過(guò)多重基因分型試驗(yàn)對(duì)39個(gè)遺傳變異進(jìn)行基因分型。進(jìn)行變異與ICI療效和無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）之間的關(guān)聯(lián)分析。

結(jié)果有3種免疫遺傳學(xué)變異被鑒定為PD-1/PD-L1阻斷反應(yīng)的預(yù)測(cè)因子。來(lái)自ATG7 rs7625881、CD274 rs2297136 和TLR4 rs1927911的突變等位基因在ICI治療后腫瘤進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)均增加。顯著的免疫遺傳學(xué)變異在PD-1阻斷、肺癌或使用PD-1阻斷亞組的肺癌中也達(dá)到了類似的趨勢(shì)。此外，CD274 rs2297136和TLR4 rs1927911突變基因型表達(dá)者PFS較差，均為獨(dú)立的預(yù)后因素。

研究人員表示，該研究揭示了免疫基因多態(tài)性作為一種潛在的生物標(biāo)志物，其中ATG7 rs7625881、CD274 rs2297136 和TLR4 rs1927911首次被確定為腫瘤患者對(duì)PD-1/PD-L1阻斷反應(yīng)的潛在預(yù)測(cè)因子，可以預(yù)測(cè)腫瘤患者接受PD-1/PD-L1阻斷的治療效果和生存，為腫瘤的個(gè)性化免疫治療提供了新的依據(jù)。

不同調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡模式預(yù)測(cè)肺腺癌的免疫微環(huán)境和藥物敏感性

肺腺癌（LUAD）是一種常見(jiàn)的肺癌類型，但其發(fā)病機(jī)制目前仍然不清楚。細(xì)胞死亡是一種重要的生物學(xué)過(guò)程，可以調(diào)節(jié)腫瘤的免疫微環(huán)境和藥物敏感性。然而，LUAD中不同的細(xì)胞死亡模式如何相互作用和影響腫瘤的生物學(xué)特征尚未得到全面的研究。

近日，四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授、周娟教授團(tuán)隊(duì)的一篇文章，系統(tǒng)地分析了LUAD中15種細(xì)胞死亡模式的基因表達(dá)和功能，以及它們與免疫微環(huán)境和藥物敏感性的關(guān)聯(lián)。該研究發(fā)表在Journal of Cellular Physiology（IF：5.6）。

該研究團(tuán)隊(duì)利用四個(gè)公開(kāi)的LUAD數(shù)據(jù)集（TCGA、KM-plotter、GSE31210和GSE30219），構(gòu)建了一個(gè)綜合的細(xì)胞死亡評(píng)分系統(tǒng)，反映了腫瘤中不同的細(xì)胞死亡模式的活性。他們發(fā)現(xiàn)，高細(xì)胞死亡評(píng)分與LUAD患者的預(yù)后顯著相關(guān)，且與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、免疫檢查點(diǎn)分子表達(dá)、免疫基因集活性和免疫治療反應(yīng)呈正相關(guān)。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，不同的細(xì)胞死亡模式對(duì)免疫微環(huán)境的影響存在差異，例如，凋亡和壞死性炎癥性細(xì)胞死亡與免疫活化相關(guān)，而自噬和發(fā)炎性細(xì)胞死亡與免疫抑制相關(guān)。此外，細(xì)胞死亡評(píng)分可以預(yù)測(cè)LUAD對(duì)不同化療藥物的敏感性，例如，高細(xì)胞死亡評(píng)分與對(duì)白蛋白紫杉醇、多西他賽和吉西他濱的敏感性相關(guān)，而與對(duì)順鉑和卡鉑的耐藥性相關(guān)。

總之，該研究揭示了LUAD中多種細(xì)胞死亡模式的綜合作用模式，以及它們與免疫微環(huán)境和藥物敏感性的關(guān)聯(lián)，為L(zhǎng)UAD的分子分型和個(gè)性化治療提供了新的思路和依據(jù)。