親和層析填料藍膠的應(yīng)用領(lǐng)域及案例分享
在生物醫(yī)藥行業(yè)中，如果我們首次進入一個下游工藝的實驗，一眼望去，可以看到各種各樣的填料。這些裝在瓶子里或者桶里的填料，有的透亮，有的顯示出白色。倘若有一款填料，瓦藍瓦藍的，與同類顯得格外不同，一定會吸引你的目光。這就是今天本文所介紹主角，一款非常獨特的親和填料——藍膠。
簡單說，藍膠是用Cibacron Blue 3GA染料分子作為親和配基的一款神奇的親和層析填料。這個染料分子天然顯示出藍色，由其制備而成的填料也就顯得瓦藍瓦藍的，這就賦予了這款填料的一個獨特外號“藍膠”。
藍膠的應(yīng)用領(lǐng)域Cibacron Blue 3GA分子屬于蒽醌衍生物，分子結(jié)構(gòu)中有氨基、磺酸基和苯基，以其核苷酸特異性、離子和疏水性捕獲蛋白質(zhì)[1]。
一般來說，藍膠除了可以特異性地結(jié)合白蛋白外，也可以結(jié)合干擾素及其他血漿蛋白；另外，它對于多種蛋白酶都有著出色的結(jié)合效果，包括脫氫酶、激酶、轉(zhuǎn)移酶，以及大多數(shù)含腺苷酸的輔酶，例如NAD+。
博格隆供應(yīng)Blue Bestarose FF、Blue Bestarose HP、Diamond Blue、Diamond Blue Mustang 4款優(yōu)異的藍膠產(chǎn)品，技術(shù)參數(shù)如下表：
+接觸時間：4min
• 樣品：人血白蛋白
• 層析柱：EzFast，1 mL
• 流速：0.2mL/min
• 結(jié)合液：50mM KH2PO4，pH7.0
• 洗脫液：1.5M NaCl，50 mM KH2PO4，pH7.0
Fig. 1 Blue Bestarose FF結(jié)合洗脫圖譜
應(yīng)用案例2• 樣品：人血上清稀釋樣 120mL
• 層析柱：EzFast Blue FF 5mL
• 流速：1mL/min
• 平衡：20mM NaH2PO4，pH7.0
• 淋洗：20mM NaH2PO4，0.5M NaCl，pH7.0
• 洗脫：20mM NaH2PO4，2M NaCl，pH7.0
Fig. 2 EzFast Blue FF洗脫產(chǎn)物的毛細管電泳分析圖譜[2]
Fig. 3 白蛋白純化數(shù)據(jù)分析[2]
如Fig. 3所示，洗脫產(chǎn)物純度達90%，回收率為49.59%，濃度為12.08mg/mL。
參考資料
[1] Subramanian S. Dye-ligand affinity chromatography: the interaction of Cibacron Blue F3GA with proteins and enzymes. CRC Crit Rev Biochem. 1984;16(2):169-205
[2] 呂興凱, 王吟, 任科云, 胡尚杰, 何昆, 陳愛芳, 張帆. 毛細管電泳法分析人血白蛋白純化工藝的有效性[J]. 中國生物制品學(xué)雜志, 2020, 33 (12): 1441-1444.
