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質(zhì)譜儀的發(fā)展過(guò)程簡(jiǎn)介及其工作原理的介紹

瀏覽次數(shù):752 發(fā)布日期:2024-8-16  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

質(zhì)譜儀可能小如一枚硬幣,也可能占據(jù)一個(gè)非常大的房間。盡管各種儀器類型用于截然不同的應(yīng)用,但它們的一部分工作原理仍是相同的,F(xiàn)已采用道爾頓(Da)取代其他術(shù)語(yǔ)(例如amu)作為質(zhì)譜測(cè)量單位。1 Da = 一個(gè)碳12 (12C)同位素原子質(zhì)量的1/12。

過(guò)去質(zhì)譜儀只用作輔助化合物鑒定的定性設(shè)備,人們一度認(rèn)為它不能準(zhǔn)確定量。但近年來(lái),質(zhì)譜儀已被證實(shí)是一種集定性和定量能力于一體的儀器。

使用質(zhì)譜儀測(cè)定分子的質(zhì)量時(shí)必須先將分子轉(zhuǎn)化為氣相離子。為此,質(zhì)譜儀會(huì)向分子傳遞電荷,并將由此產(chǎn)生的帶電離子流轉(zhuǎn)換為成比例的電流,然后通過(guò)數(shù)據(jù)系統(tǒng)讀取該電流。數(shù)據(jù)系統(tǒng)將電流轉(zhuǎn)換為數(shù)字信息,以質(zhì)譜圖的形式呈現(xiàn)。

 

a)以類似色譜圖的形式呈現(xiàn)出不斷增大的總離子流(TIC)豐度隨時(shí)間推移而發(fā)生的變化。b)峰的每個(gè)數(shù)字切片都代表當(dāng)時(shí)構(gòu)成離子流的離子,這通常被稱為輪廓圖或連續(xù)采集。此時(shí)x軸(或“時(shí)間”軸)是質(zhì)荷比(m/z),很明顯可以看出分辨譜圖中相鄰離子(如同位素)的能力。c)輪廓圖質(zhì)譜圖通常又可簡(jiǎn)化為“棒狀圖”,棒狀圖由從每個(gè)峰頂點(diǎn)處繪制的質(zhì)心表示,能夠減少存儲(chǔ)文件的大小,有利于增加分辨率信息。
 
a)以類似色譜圖的形式呈現(xiàn)出不斷增大的總離子流(TIC)豐度隨時(shí)間推移而發(fā)生的變化。b)峰的每個(gè)數(shù)字切片都代表當(dāng)時(shí)構(gòu)成離子流的離子,這通常被稱為輪廓圖或連續(xù)采集。此時(shí)x軸(或“時(shí)間”軸)是質(zhì)荷比(m/z),很明顯可以看出分辨譜圖中相鄰離子(如同位素)的能力。c)輪廓圖質(zhì)譜圖通常又可簡(jiǎn)化為“棒狀圖”,棒狀圖由從每個(gè)峰頂點(diǎn)處繪制的質(zhì)心表示,能夠減少存儲(chǔ)文件的大小,有利于增加分辨率信息。

可以通過(guò)多種適合目標(biāo)分析物的方式生成離子:
將溶于基質(zhì)的化合物上樣至平坦表面進(jìn)行激光燒蝕,例如MALDI
讓化合物與高能粒子或電子相互作用,例如電子轟擊電離(EI)
將電離作為傳輸過(guò)程本身的一部分,例如我們已經(jīng)了解的電噴霧電離(ESI)技術(shù)會(huì)對(duì)液相色譜儀的洗脫液施加高壓,從而在氣溶膠中生成離子
質(zhì)譜儀將根據(jù)離子的質(zhì)荷比(m/z)對(duì)離子進(jìn)行分離、檢測(cè)和測(cè)定。繪制相對(duì)離子流(信號(hào))與m/z的關(guān)系圖,生成質(zhì)譜圖。小分子通常只帶一個(gè)電荷:因此m/z是質(zhì)量(m)除以1的值。“1”代表電離過(guò)程中添加的質(zhì)子[表示為M+H+,如果通過(guò)失去質(zhì)子形成離子,則為M-H-],如果離子是通過(guò)失去電子形成的,則表示為自由基正離子[M+.]。不同質(zhì)譜儀的準(zhǔn)確度或?qū)嶋H測(cè)定真實(shí)質(zhì)量的能力可能會(huì)有所不同,相關(guān)內(nèi)容請(qǐng)參閱本入門(mén)指南的后面部分。
較大的分子在其結(jié)構(gòu)內(nèi)的多個(gè)位置捕獲電荷。小分子肽通?蓭蓚(gè)電荷(M+2H+),而非常大的分子有許多位點(diǎn),因此可以通過(guò)簡(jiǎn)單的算法來(lái)推斷譜圖出現(xiàn)的離子的質(zhì)量。


 

 
經(jīng)正確校準(zhǔn)后,低分辨率儀器可以提供非常準(zhǔn)確的質(zhì)量數(shù),但由于分辨率空間有限,隨著數(shù)據(jù)堆集,可提供的有關(guān)譜圖的信息也逐漸減少。緩激肽(一種9氨基酸肽)的常見(jiàn)代謝片段BK1-5(即Arg-Pro-Pro-Gly-Phe,是一種ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶)抑制劑,用于擴(kuò)張血管)可攜帶兩個(gè)電荷(單電荷(M+H)產(chǎn)生單同位素質(zhì)量數(shù)573.3149,而雙電荷版本(M+2H)的質(zhì)量數(shù)為287.1614)。同位素帶雙電荷,也開(kāi)始填充可用的分辨率空間。

可分析的分子大小上限是多少?
解吸方法(已在本入門(mén)指南中介紹)擴(kuò)展了分析大分子、非揮發(fā)性、易碎分子的能力。在40,000 Da范圍內(nèi)以0.01%的準(zhǔn)確度(或4 Da以內(nèi))進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)可以確定微小的變化,例如翻譯后修飾。多電荷態(tài)使質(zhì)譜儀遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其設(shè)計(jì)范圍上限,包括1,000,000 Da及以上的質(zhì)量。
同位素和元素質(zhì)譜

天然同位素豐度已得到充分表征。盡管通常認(rèn)為該參數(shù)較穩(wěn)定,但它仍然可以顯示出顯著的特征差異。同位素比測(cè)定被用于代謝研究(使用富含同位素的元素作為示蹤劑)以及氣候研究(測(cè)定與溫度相關(guān)的氧和碳變化)。在實(shí)際應(yīng)用中,使用高精度功能(如扇形磁場(chǎng)儀器上的功能)分析復(fù)雜分子之前要先將其碎裂為簡(jiǎn)單的分子組分(請(qǐng)參閱下一節(jié))。

元素分析通常用于分析無(wú)機(jī)材料 - 旨在確定元素組成,而非結(jié)構(gòu) - 在某些情況下使用固體金屬樣品。在使用放電裝置(或低功率輝光放電裝置)來(lái)電離樣品的應(yīng)用中,電感耦合等離子體(ICP)離子源很常用。使用專用儀器在ppt水平行檢測(cè)的應(yīng)用并不少見(jiàn)。
來(lái)源:譜質(zhì)分析檢測(cè)技術(shù)(上海)有限公司
聯(lián)系電話:18321902003
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