題目：Thrombospondin-1 counteracts the p97 inhibitor CB-5083 in colon carcinoma cells
期刊：Cell cycle
作者：Nam-Gu Her, Santosh Kesari & Elmar Nurmemmedov
單位：韓國(guó)放射醫(yī)學(xué)研究所放射生物醫(yī)學(xué)研究院
前言：
    在抗癌治療過(guò)程中，癌細(xì)胞對(duì)蛋白酶體抑制劑的耐藥性會(huì)使得抗癌療法在臨床應(yīng)用中無(wú)效。但潛在的機(jī)制仍需進(jìn)行深入的研究。
    由于p97在蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中具有重要的功能，抑制p97能夠引起細(xì)胞的蛋白毒性應(yīng)激，因此研究人員最近將其作為癌癥的治療靶點(diǎn)并進(jìn)行相關(guān)的研究。CB-5083是一種有效的、選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)性p97抑制劑。已有多項(xiàng)研究表明，CB-5083的抗腫瘤活性與p97 mRNA和蛋白表達(dá)水平密切相關(guān)。但是，細(xì)胞對(duì)p97抑制敏感性的潛在調(diào)節(jié)機(jī)制仍未得到充分的研究。
    在本文中，研究人員證明血小板反應(yīng)蛋白-1（THBS1）是一個(gè)CB-5083上調(diào)的基因，有助于賦予HCT116細(xì)胞對(duì)CB-5083的抗性。CB-5083能夠顯著增強(qiáng)THBS1的穩(wěn)態(tài)豐度。阻斷THBS1誘導(dǎo)使細(xì)胞對(duì)CB-5083介導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制敏感。抑制THBS1導(dǎo)致CB-5083誘導(dǎo)的Caspase 3/7活性增加，表明其功能與p97抑制下的癌細(xì)胞存活有關(guān)�？傮w而言，本文證明了THBS1在細(xì)胞對(duì)p97抑制的敏感性上起著重要的作用。
 
本文用到的實(shí)驗(yàn)方法如下：  
結(jié)論：
    本文通過(guò)多種方法研究表明，THBS1通過(guò)增加其蛋白表達(dá)水平對(duì)p97的抑制提供了保護(hù)機(jī)制，從而提示了對(duì)p97抑制治療的新抗性機(jī)制。THBS1提供了保護(hù)性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，能夠發(fā)揮與ERAD相反的功能，并能使得細(xì)胞逃逸凋亡。當(dāng)敲低THBS1后，HCT116細(xì)胞對(duì)CB-5083的抑制敏感，并且研究結(jié)果也表明，si THBS1的作用只有對(duì)CB-5083處理后的細(xì)胞作用明顯，且細(xì)胞無(wú)法獲得p97抑制劑的耐藥性。
    總而言之，本文為CB-5083的治療潛力及其耐藥機(jī)制提供了新的見(jiàn)解。

文中對(duì)細(xì)胞增殖的測(cè)定是通過(guò)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀FACSCOPE B每隔24h對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)得到的結(jié)果，結(jié)果如下圖所示：
那么FACSCOPE B有何種優(yōu)勢(shì)呢？
    FACSCOPE B是一種基于明場(chǎng)顯微鏡技術(shù)的全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)，用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞計(jì)數(shù)。FACSCOPE B 采用高功率LED光源， CMOS圖像檢測(cè) (5MP)， 精準(zhǔn)的XYZ軸以及 on-slide圖像處理技術(shù)，能用于快速準(zhǔn)確的細(xì)胞分析。
    使用FACSCOPE B進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)分為3步，(1)細(xì)胞染色，(2)上樣，(3)計(jì)數(shù)。細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染料混合，以區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。將染色的樣品加入一次性塑料計(jì)數(shù)片中(每張計(jì)數(shù)片4次測(cè)試)，并將計(jì)數(shù)片插入FACSCOPE B進(jìn)行計(jì)數(shù)。插入計(jì)數(shù)片后，光學(xué)系統(tǒng)自動(dòng)聚焦在計(jì)數(shù)片上，然后FACSCOPE B自動(dòng)采集和分析圖像。精確的XYZ軸通過(guò)預(yù)設(shè)路線移動(dòng)，為每個(gè)通道拍攝多個(gè)圖像。高靈敏度的CMOS傳感器采集明場(chǎng)顯微鏡圖像，并將圖像發(fā)送到集成系統(tǒng)進(jìn)行圖像處理和分析。整個(gè)計(jì)數(shù)過(guò)程需要2分鐘，計(jì)數(shù)結(jié)果顯示在儀器正面的LCD面板上。