SM-102 是一種氨基陽離子脂質，可用于形成脂質納米顆粒 (LNPs)。SM-102 具有更高的轉染效率。SM-102 在脂質納米顆粒傳遞 mRNA 治療藥物和疫苗的有效性中發(fā)揮重要作用。SM-102 (100 —— 300µM, 1 min) 濃度依賴性地抑制 GH3 細胞的erg介導的K+電流(i k (erg))。
 
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生物活性
 
體外研究
 
脂質納米顆粒的制備
 
在這里，我們提供FDA批準的mRNA-1273（一種COVID-19 mRNA疫苗）中LNPs的脂質摩爾比例。該配方中脂質的摩爾比例為SM-102：DSPC：膽固醇：DMG-PEG 2000 = 50：10：38.5：1.5[1]，RNA與脂質的重量比例為0.05 (wt/wt)。
 
A. 脂質混合物制備
 
1、將脂質溶解在乙醇中，制備10mg/m的儲備溶液。脂質儲備溶液可以存儲在−20°C以便后續(xù)使用。
 
注意事項1：離子化脂質通常為液體。由于其黏度，應始終稱量而不是依賴自動移液器的體積。
 
注意事項2：溶液中的膽固醇應保溫(>37℃)以保持流動性。迅速轉移膽固醇溶液以避免冷卻。
 
2、按照描述準備脂質混合溶液。對每毫升的脂質混合物添加: 572 µL的10mg/mL SM-102(HY-134541)、240 µL的10mg/mL膽固醇(HY-N0322)、127 µL的10mg/mL DSPC(HY-W040193) 和 61 µL的DMG-PEG 2000 (HY-112764)。徹底混合溶液以達到清澈的溶液。這個混合物含有10毫克的總脂質。
 
注意事項3：脂質和比例的選擇可以根據(jù)需要更改，這將影響LNP的性質（大小，多樣性，有效性）以及所需的mRNA的量。
 
B. mRNA制備
 
1、用100 mM pH 5的醋酸鈉緩沖液制備166.7 µg/mL的mRNA溶液。
 
注意事項4：脂質:mRNA重量比影響包封效率�？梢詼蕚淦渌�重量比作為替代配方，并應由用戶相應調整。
 
C. 混合
 
有三種常用的快速混合溶液的方法：移液管混合法，漩渦混合法和微流控混合法。所有這些混合方法都可以用于各種應用。
 
重要的是要注意，移液管混合方法和漩渦混合法可能產生更多的異質LNPs，并且封裝效率較低，易變化。微流控設備能夠以高度可控、可重復的方式進行快速混合，從而實現(xiàn)均勻的LNPs和高封裝效率。在這些設備中，醇脂質混合物與水溶液被迅速地結合在單個流中。當兩個流混合時形成LNPs，然后收集到一個收集管中。
 
1、吸管混合法：
 
1.1. 吸取3毫升mRNA溶液，迅速加入到1毫升脂質混合溶液中（通常使用醇脂混合物與水相緩沖液的1:3比例）�？焖偕舷挛�取20-30秒。
 
1.2. 將得到的溶液在室溫下孵育最多15分鐘。
 
1.3. 混合后，將LNPs對PBS（pH 7.4）進行透析2小時，然后使用0.2微米過濾器無菌過濾，并儲存于4°C。
 
2、渦旋混合法：
 
2.1. 在渦旋混合器上以適中的速度渦旋3毫升的mRNA溶液。然后，迅速將1毫升的脂質混合溶液加入到渦旋的溶液中（通常使用醇脂混合物與水相緩沖液的1:3比例）。繼續(xù)渦旋得到的分散體另外20-30秒。
 
2.2. 將得到的溶液在室溫下孵育最多15分鐘。
 
2.3. 混合后，將LNPs對PBS（pH 7.4）進行透析2小時，然后使用0.2微米過濾器無菌過濾，并儲存于4°C。  
 
3、微流體混合法：
 
3.1 mRNA緩沖溶液3毫升和脂質混合物溶液1毫升在微流體設備中以總流量12 mL/min混合（通常使用醇脂混合物與水相緩沖液的1:3比例）。
 
注釋5：可以更改流量比率和總流量等參數(shù)來進行LNPs的微調。
 
3.2. 混合后，將LNPs對PBS（pH 7.4）進行透析2小時，然后使用0.2微米過濾器無菌過濾，并儲存于4°C。