貝伐珠單抗Bevacizumab 是一種人源化的單克隆抗體，高親和力且特異性地與所有 VEGF-A 結(jié)合。

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Bevacizumab中文名貝伐珠單抗-MCE的生物活性

體外

人源化單克隆抗體Bevacizumab特異性結(jié)合所有VEGF-A同種型，具有高親和力，并抑制其與VEGFR-1和VEGFR-2的相互作用。 實(shí)驗(yàn)分析表明，通過ELISA分析貝伐單抗對結(jié)合VEGF的EC50為0.18μg/ mL。 結(jié)合動(dòng)力學(xué)測定顯示類似的結(jié)果，貝伐單抗抑制VEGF誘導(dǎo)的HUVEC增殖，IC50值為0.047±0.0081μg/ mL 。

體內(nèi)

結(jié)果表明，與對照組相比，F(xiàn)D006，貝伐珠單抗Bevacizumab和地塞米松的結(jié)膜下給藥均能顯著抑制NaOH燒灼大鼠的CoNV [p] 。 NVP-LDE225和紫杉醇的組合產(chǎn)生持久的抗腫瘤活性，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤大小為1.64cm3，而貝伐單抗加紫杉醇處理的小鼠在第84天達(dá)到最大允許的腫瘤大小

實(shí)驗(yàn)參考方法

貝伐珠單抗Bevacizumab激酶測定

使用Octet RED上的Bio-Layer Inter-Ferometry測量貝伐單抗或FD006與VEGF的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。 該測定在30℃下在PBS緩沖液中進(jìn)行。 在使用前將傳感器尖端在緩沖液中預(yù)濕15分鐘，并且每孔200μL稀釋樣品（VEGF）或緩沖液填充微孔板，并以1000rpm攪拌。 將抗人IgG生物傳感器用Bevacizumab貝伐珠單抗或FD006（10μg/ mL）預(yù)飽和，并在緩沖液中洗滌120秒，然后以10μg/ mL，3μg/ mL和1μg/ mL的濃度轉(zhuǎn)移至VEGF。 。 分別測量VEGF結(jié)合和解離速率5分鐘和10分鐘。 使用Octet分析軟件從非線性全局?jǐn)M合計(jì)算動(dòng)力學(xué)參數(shù)（Kon和Koff）和親和力（KD）。 進(jìn)行多次獨(dú)立測量。

MCE尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。 它們僅供參考。

貝伐珠單抗Bevacizumab細(xì)胞分析

將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）（1×104細(xì)胞/100μL/孔）接種于96孔板中，37℃培養(yǎng)14小時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充5％熱滅活FCS，100U / mL 青霉素，100 U / mL鏈霉素和內(nèi)皮細(xì)胞生長補(bǔ)充劑。 在低血清饑餓過夜后，用不同濃度的FD006或貝伐單抗處理細(xì)胞，其與10ng / mL VEGF預(yù)孵育30分鐘，并在37,5％CO 2下孵育72小時(shí)。 然后，向每個(gè)孔中加入10μLCCK8并再孵育4小時(shí)。 通過分光光度計(jì)在450nm處測量吸光度以確定細(xì)胞活力。

MCE尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。 它們僅供參考。

Animal Administration

大鼠

造模后，將90只大鼠隨機(jī)分為5組（每組18只大鼠），接受結(jié)膜下注射，每只大鼠0.05mL（1）0.9％NaCl，（2）溶劑，（3）0.1％地塞米松（地塞米松磷酸鈉） ），（4）25 mg / mL貝伐單抗和（5）25 mg / mL FD006在造模后第1天的上顳結(jié)膜。 所有化學(xué)灼傷和治療均由一名研究人員進(jìn)行。 操作者對每個(gè)角膜來源的治療組不知情。 在術(shù)后第3,7,14,21和28天，在用過量10％水合氯醛處死大鼠后，收獲眼睛用于進(jìn)一步研究。

小鼠

將5周齡Balb / cAnNCrlBR無胸腺（nu + / nu +）小鼠注射到第四乳腺脂肪墊中，將MDA-MB-468細(xì)胞（每只小鼠107個(gè)細(xì)胞）重懸于200μL基質(zhì)膠中。 腫瘤細(xì)胞注射后7天，隨機(jī)分配荷瘤小鼠（每組n = 10）以接受以下劑量：每天口服NVP-LDE225 20mg / kg，持續(xù)4周; 貝伐單抗5mg / kg靜脈內(nèi)（i.v.），每周兩次，持續(xù)4周，或這些藥物的組合與紫杉醇靜脈注射。 每周一次10毫克/千克，持續(xù)4周。 用游標(biāo)卡尺評估腫瘤直徑，并測量腫瘤體積（cm 3）。

MCE尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。 它們僅供參考。