蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定，即確定氨基酸的線性序列，是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)之一。自從1950年代首次測定胰島素的氨基酸序列以來，技術(shù)已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步。下面是測定蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的基本步驟和一些常用方法：

1.蛋白質(zhì)純化：

首先，需要將目標(biāo)蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和雜質(zhì)中分離出來。

2.切割蛋白質(zhì)：

蛋白質(zhì)的長度可能非常長，直接測定其氨基酸序列可能是困難的。因此，通常使用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶或胃蛋白酶）來將蛋白質(zhì)切割成較短的肽段。

3.肽段排序：

通過多次切割和不同的酶，可以得到重疊的肽段，這些重疊片段可以幫助排列整個蛋白質(zhì)的氨基酸序列。

4.測定肽段的氨基酸序列：

（1）Edman 降解法：這是一種經(jīng)典的技術(shù)，通過逐步去除肽鏈的N端氨基酸來確定序列。盡管這個過程相對緩慢，但它非常準(zhǔn)確，尤其適用于較短的肽段。

（2）質(zhì)譜法：現(xiàn)代技術(shù)更傾向于使用質(zhì)譜測序來確定蛋白質(zhì)和肽段的氨基酸序列。通過質(zhì)譜，可以測定分子的質(zhì)量，并根據(jù)質(zhì)量確定氨基酸的順序。

5.蛋白質(zhì)序列的重建：

一旦所有的肽段都被測序，就可以通過查找這些肽段之間的重疊區(qū)域來重建整個蛋白質(zhì)的氨基酸序列。

6.與數(shù)據(jù)庫比對：

得到的氨基酸序列可以與已知的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，以確定是否與其他已知蛋白質(zhì)相似或相同。

圖1

隨著技術(shù)的發(fā)展，尤其是質(zhì)譜技術(shù)，蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定變得越來越快速和準(zhǔn)確。此外，隨著更多的蛋白質(zhì)被測序并存儲在公開數(shù)據(jù)庫中，研究者可以更容易地識別和比較新發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。