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借助假病毒顆粒和螢光素酶報(bào)告基因定量檢測(cè)病毒侵入的方法

瀏覽次數(shù):864 發(fā)布日期:2024-3-5  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一,什么是病毒

具有感染性,能夠?qū)е录膊〉奈⑿〉姆羌?xì)胞型生物。

 

 

各種形態(tài)和大小的病毒
 

雖然形態(tài)不一樣,但是大部分的病毒在分子水平上的組成上有一定的相似性
 

二,病毒顆粒的共有元件:

1. 由DNA或RNA組成的基因組(遺傳物質(zhì))

2. 包裹著病毒基因組的蛋白質(zhì)衣殼(capsid)

3. 某些病毒具有脂質(zhì)包膜(envelope)

4. 介導(dǎo)進(jìn)入宿主細(xì)胞的蛋白


三,病毒的生命周期

 


病毒的侵入階段(virus entry)是開(kāi)發(fā)抗病毒藥物和疫苗的重要靶點(diǎn)

1. 粘附(Attachment)

2. 穿入(Penetration)

3. 脫衣殼(Uncoating)

4. 生物合成(Biosynthesis)

5. 組裝(Assembly)

6. 釋放(Release)


四,報(bào)告基因檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于病毒研究中

應(yīng)用報(bào)告基因技術(shù)的好處:

• 可以消除或減少操作傳染性病毒的需要

• 可以在更低級(jí)別的生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行研究

• 可以加速高風(fēng)險(xiǎn)病毒的研究


五,借助假病毒顆粒和螢光素酶報(bào)告基因定量檢測(cè)病毒侵入

假病毒顆粒( Pseudotyped Viral Particles,PVPs)

• 病毒衣殼蛋白或包膜蛋白包裹攜帶有報(bào)告基因的異源核酸

• 不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力,僅有一輪感染能力

• 可更安全的用于中和抗體及抗病毒藥物檢測(cè)

• 利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞內(nèi)組裝形成
 

我們可以通過(guò)收集培養(yǎng)基上清,裂解細(xì)胞獲得假病毒顆粒,獲得假病毒顆粒后,用它來(lái)感染帶有相應(yīng)受體的細(xì)胞,72h后經(jīng)過(guò)粘附,穿入和脫衣殼,病毒攜帶的報(bào)告基因會(huì)在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),通過(guò)檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平,就可以判斷病毒侵入的水平。 這里的報(bào)告基因是螢光素酶,螢光素酶更適用于定量檢測(cè)的報(bào)告基因。當(dāng)我們要研究中和抗體實(shí)驗(yàn)的時(shí)候可以在病毒最初的粘附階段進(jìn)行相應(yīng)的處理,檢測(cè)其對(duì)病毒侵入是否有抑制作用。

 

 


假病毒顆粒,其衣殼蛋白或包膜蛋白會(huì)包裹攜帶有報(bào)告基因的異源核酸,并且這種假病毒顆粒不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力,僅有一輪感染能力。所以可以更安全的用于中和抗體及抗病毒藥物檢測(cè)。
 

逐典螢光素酶報(bào)告基因

 


針對(duì)報(bào)告基因檢測(cè)不同的側(cè)重需求,逐典推出了3種檢測(cè)系統(tǒng)。

 

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